荧光定量分析方法.pptxVIP

第1页/共19页;为常数，其值取决于荧光效率; 根据 ，在低浓度时，溶液的荧光强度与溶液中荧光物质的浓度呈线性关系；但当ECl0.05时，(3)式括号中第二项以后的数值就不能忽略，此时荧光强度与溶液浓度之间不呈线性关系。;荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法高，是因为：;二、定量分析方法 1 依据：荧光强度与荧光物质浓度的关系，在低浓度时二者成线性关系：F=KC 2 荧光定量分析方法： 校正曲线法：配制空白溶液以及一系列浓度梯度的待测物的标准溶液，试样经过相同的处理之后分别测定荧光强度：F0、Fs、Fx，然后作（ Fs - F0）— C 曲线，根据（Fx–F0)，从工作曲线上求得待测物的浓度（或含量）。 ;例题：1g谷物的制品试样，用酸处理，分离出核黄素(VB2)及少量无关杂质，加入少量KMnO4，将核黄素氧化，过量的KMnO4用H2O2除去。将此溶液移入50ml容量瓶中，稀释至刻度。吸取25ml放入样品池中以测量荧光强度（核黄素中常含有荧光的杂质叫光化黄）。事先将荧光计用硫酸奎宁调整至刻度100处。测定得到氧化液的读数为6.0格。加入少量的连二亚硫酸钠(Na2S2O4)，使氧化态核黄素（无荧光）重新转化为核黄素，这时荧光计读数为55格。在另一样品池中重新加入24ml被氧化的核黄素溶液，以及1