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目录目录4荧光定量PCR原理123定量PCR的实验流程几种定量方法的比较 StepOne Plus与ViiA7比较及应用 QPCR定量的常见问题5第1页/共27页第一页，共28页。 什么是PCR1.1 什么是PCR？1、荧光定量PCR原理理想的PCR以2n次方扩增，即： DNAn=DNA0×2n第2页/共27页第二页，共28页。 QPCR定义 Real time Q-PCR 通过对 PCR 扩增反应中每一次循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。1.2 QPCR定义第3页/共27页第三页，共28页。 1.3 数学原理Real time Q-PCR动力学曲线可以分成四个阶段：基线阶段 , 指数增长期、线性增长期和平台期。第4页/共27页第四页，共28页。 第5页/共27页第五页，共28页。 基线→阈值→CT值→ [DNA]0定量PCR的几个重要的参数：基线就是扩增曲线的水平部分。第6页/共27页第六页，共28页。 什么是阈值？基线（空白）信号的产生是由于背景引起的。默认阈值=基线（背景）信号标准偏差x10第7页/共27页第七页，共28页。 什么是CT值？ 荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，一般荧光域值的缺省设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的 10 倍。从基线到指数增长的拐点