荧光定量PCR检测项目.pptxVIP

实时荧光定量PCR 方法 ------TaqMan法　　方法： TaqMan法TaqMan---水解型杂交探针与目标序列互补5′端标记有荧光报告基团(Reporter, R) ，如FAM、VIC等 3′端标记有荧光淬灭基团 (Quencher, Q)探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针第1页/共28页第一页，共29页。 5’3’5’5’3’5’ForwardPrimerReversePrimerTaqMan? ProbeRQTaqman实时PCR的反应过程第2页/共28页第二页，共29页。 Displacement5’3’5’5’3’5’ForwardPrimerReversePrimerRQ第3页/共28页第三页，共29页。 Hydrolysis5’3’5’5’3’5’QR第4页/共28页第四页，共29页。 Polymerization Completed5’3’5’5’3’5’RQ每扩增一条DNA分子，释放一个荧光信号，可以在循环过程中任一点检测荧光第5页/共28页第五页，共29页。 实时荧光定量PCR定义　在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法第6页/共28页第六页，共29页。 实时荧光定量PCR 原理