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组织化学实验 实验十五、小鼠肝糖原染色——PAS反应 实验十六、小鼠肝/肠核酸染色——Feulgen反应 实验目的 1.了解PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain ）的基本原理，掌握PAS染色法的技术方法 及其应用。 2. 了解孚尔根染色法的基本原理，掌握孚尔根 染色法的技术方法及其应用。 小鼠肝糖原染色——PAS反应 v 糖原是由多个葡萄糖组成的带分枝的大分子多 糖，形状为大小不等的颗粒，遇碘则变褐色，易 溶于水。 v 动物细胞内贮存的多糖，完全由葡萄糖组成。 在动物体内以肝脏和骨骼肌中储量最丰富，与淀 粉在植物中的作用相当。 v肝糖原分解主要维持血糖浓度，肌糖原分解为肌 肉自身收缩供给能量。 PAS （Periodic Acid Schiff ） 反的基本原理 利用氧化使多糖 生游离的基， 基和Schiff合 ，形成紫色的化合 物。因此在有多糖的 部位，就会呈除紫 色阳性反。 Schiff氏的制 将0.5g碱性品置入三角瓶内沸的蒸水中， 玻璃瓶，煮沸5min使之充分溶解，冷却至50℃， 加入10ml 1M HCl，冷至25℃，加入0.5g偏重硫酸 (NaS O )或无水硫酸(NaHSO)，在室温冷暗至少放置 2 2 3 3 24h(有需2~3天)，使其色退至淡黄色，密封瓶口，藏 于暗，最好保存于4℃冰箱中(可保存数月或更) 。在使用前加入0.5g活性碳, 1min, 用粗 ， 液无色；若液体色粉色，便不能再用。 PAS反应的应用 可用于证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ， 心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ，糖原累 积病诊断和研究 ，糖尿病的诊断和研究 ，用 于某些肿瘤的诊断等。在临床诊断、分类和 治疗具有重要的意义。 实验材料 1) 组织切片(70%酒精中)，鸭血涂片 2) 过碘酸液 3) Schiff 氏液 4) 0.5 偏重亚硫酸盐溶液 5) 苏木精染色液 实验步骤（ PAS反应） 1. 将石蜡切片（已保存于70 酒精中）移入50 酒精复水5 min 2.石蜡切片及鸭血涂片用蒸馏浸洗1次，1 min; 3. 过碘酸液处10 min （对照实验用蒸馏水浸泡）; 4. 蒸馏水洗1次，2 min; 5. Schiff 试剂中放置 20 min; 6. 亚硫酸盐溶液浸洗，3次， 每次2 min; 7. 流水冲洗5 min （避免流水直接冲洗有组织的部位）, 蒸馏水过一下; 8. 用苏木精复染细胞核10 min ; 9. 流水冲洗5 min （避免流水直接冲洗有组织的部位），蒸馏水浸泡1 min， 吸干; 10. 甘油封片; 11. 显微镜观察。 结果分析 PAS阳性呈不同程度的紫红色，细胞核蓝色。 Feulgen反(Feulgen reaction) 是示DNA的最典型 的化学反， 学者Feulgen于 1924年明，称 Feulgen法。因DNA 的示反具有高度 一性，故常被用来 示胞内DNA的分 布情况。 Feulgen反的基本原理 稀HCl水解DNA，破坏呤 和脱氧核糖的配糖， 并在脱氧核糖C 端形成游 1 离的基，基和Schiff 合，形成紫色 的 化合物。因此在有DNA的 部位，就会呈除紫色 阳性反。 实验步骤（ Feulgen反应） 1. 将石蜡切片（已保存于70 酒精中）移入50 酒精复水5 min 2. 石蜡切片及鸭血涂片用蒸馏水洗1次，2 min; 3. 1 mol/L HCl溶液(室温) 1min; 4. 换入预热60℃的1 mol/L HCl 中水解