细胞融合和单细胞克隆.pptx

细胞融合和单细胞克隆 重点难点1、教学重点: 单克隆抗体得制备和应用2、教学难点: 单克隆抗体得制备过程 问题探讨 “番茄—马铃薯”(理想图) 通过长期得实验,科学家们采用体细胞杂交技术获得了“番茄—马铃薯”植株。 如果将奶牛得细胞与植物细胞杂交,得到绿色得小奶牛,那岂不就是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？动物细胞也能融合吗？ 教学过程一、动物细胞融合1、动物融合得过程请同学们阅读课本P52动物融合 动物细胞融合过程示意图不同DNA得两个细胞 灭活得病毒有丝分裂两个完整得杂交细胞 灭活病毒诱导细胞融合得原理:病毒表面含有得糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上得糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上得蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。灭活就是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏这些病原体得抗原结构。 思考题1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？ 酶解法,如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需,因为动物细胞无细胞壁3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用得方法有哪些？离心、电激等物理方法;PEG等化学方法4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其她方法吗？能 还可以利用灭活得病毒进行诱导5、植物体细胞杂交应先进行原生质体得融合再进行组织培养形 成完整得杂种个体,动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能 7、您推测一下动物细胞融合有哪些方面得应用吗？思考题 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样得应用？ 生产单克隆抗体6、您能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？ 10大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流 主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株主要用途物理、化学方法(同左)灭活得病毒物理(离心、振动、电刺激)化学(聚乙二醇)诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合得方法细胞膜得流动性细胞膜得流动性、植物细胞全能性细胞融合得原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交与动物细胞融合得比较 2、动物细胞融合得概念 动物细胞融合也称细胞杂交,就是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞得过程,融合后形成得具有原来两个或多个细胞遗传信息得单核细胞称为杂交细胞。 二、动物细胞融合(细胞杂交)－2个或多个动物细胞结合形成一个细胞得过程细胞A细胞B杂种细胞灭活得病毒物理法化学法仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒离心振动电激聚乙二醇 提问？1、抗体就是由何种细胞产生得？ 效应B细胞(浆细胞)。2、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？ 每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3、一种抗原侵入机体之后,引起机体免疫反应产生得抗体只有一种吗？ 动物在免疫反应过程中,体内产生得特异性抗体种类可多达百万种以上。4、 简述获得抗体得传统途径？ 抗原 动物体 抗体 抗原不纯 抗体不纯二、单克隆抗体刺激浆细胞 6、如何获得化学性质单一、特异性强得抗体？ 体外培养单个Ｂ淋巴细胞,提取分泌得抗体7、体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？5、这种方法获得得抗体有什么缺陷？ 产量低,纯度低,特异性差 1、设计方案:一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能够无限增殖杂种细胞二、单克隆抗体2、制备过程: 免疫小鼠培养骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白选择培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体克隆杂交细胞分开不同杂交细胞,克隆专一抗体,检验阳性细胞 单克隆抗体制备过程示意图多种杂交细胞 单克隆抗体制备过程 注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量得、能产生特定抗体得细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体 3、单克隆抗体得应用: ①在基础理论研究中具有重要意义 ②在疾病诊断、治疗和预防方面,具有 ③生物导弹二、单克隆抗体特异性强、灵敏度高 等优越性。 用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成得“早早孕诊断试剂盒”,灵敏度很高,在妊娠第8天就可以做出诊断,比原来得诊断方法提前了10天左右,可以避免孕妇在不知道妊娠得情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测得准确率在90％以上。 知识结构两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合得新方法 －－灭活得病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性 强、灵敏度高得优势 教学反馈1、动物细胞