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                蛋白质分离纯化与鉴定
    蛋白质分离纯化与鉴定是蛋白质的关键步骤,它包括从蛋白质样品中分离出蛋白质和去除剩余的其他杂质,从而确保得到高纯度的蛋白质,同时也可以利用这一步骤对蛋白质进行识别和定量。蛋白质分离纯化和鉴定依赖于特定的结合机制来对蛋白质样品和它们之间的干扰进行分离,纯化和定量,重要的是选择合适的结合机制,包括静电 结合、磁性结合和生物类比结合。
    静电结合是利用离子的电荷来实现蛋白质的结合的一种方法,如逆流苯胺凝胶电泳(IEX)、硼滤膜萃取(BFE)、凝胶乳液沉淀(GFC)等。其优势是有效的提取蛋白质,不会分离出太多的杂质,因此可用于纯化以及分离同种蛋白质,但存在着选择性不高和操作复杂的问题。
    磁性分离是利用磁性粒子将蛋白质(如金蛋白)从样品中分离出来的一种技术,主要应用于从生物体或细胞内筛选靶向蛋白质,如免疫磁珠筛选和快速免疫磁珠筛选等。优势是极好的选择性和高回收率,缺点是不能太多的纯化和定量。
    生物类比结合是指使用小分子有机分子的氢键与蛋白质聚合体的氢键形成竞争,使蛋白质结构发生变化、表面可溶性结构发生变化,以达到蛋白质分离纯化和鉴定的目的。生物类比结合技术同时具有高分辨率、高效率、低毒性及可控性优点。如两亲聚酰胺模型(TCA)技术、新型聚乙二醇活性纤维素(PEG)技术等。优势在于可同时提取多种蛋白质,经纯化后的蛋白质也能保留蛋白质的完整性,但缺点是技术操作比较复杂,耗时较久。
    蛋白质分离纯化与鉴定是一个综合技术,因此在蛋白质分离纯化及鉴定过程中应根据蛋白质特性,选择最适合自身情况的结合机制,进行一系列的步骤,以得到最纯净的蛋白质分离纯化,识别和定量的目的。
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