第六章克隆基因的表达.pptVIP

由体外重组产生的DNA分子，通过转化、转染、转导等适当途径引入宿主会得到大量的重组体细胞或噬菌体。面对这些大量的克隆群体，需要采用特殊的方法才能筛选出可能含有目的基因的重组体克隆。同时也需要用某种方法检测从这些克隆中提取的质粒或噬菌体DNA，看其是否确实具有一个插人的外源DNA片段。 目前已经发展和应用了一系列构思巧妙、可靠性较高的重组体克隆检测法，包括使用特异性探针的核酸杂交法、免疫化学法、遗传检测法和物理检测法等。 第三十页，共四十七页，2022年，8月28日 一、遗传检测法 遗传检测法可分为根据载体表型特征和根据插入序列的表型特征选择重组子两种方法。 1．根据载体表型特征选择重组体分子的直接选择法 在基因工程中使用的所有的载体分子，都带有一个可选择的遗传标记或表型特征。质粒以及柯斯载体具有抗药性标记或营养标记，而对于噬菌体来说，噬菌斑的形成则是它们的自我选择特征。 第三十一页，共四十七页，2022年，8月28日 (1) 抗药性标记插入失活选择法 pBR322质粒是DNA分子克隆中最常用的一种载体分子。编码有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。只要将转化的细胞培养在含有四环素或氨苄青霉素的生长培养基中，便可以容易地检测出获得了此种质粒的转化子细