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DB33/T XXXXX—202X 蓝莓组培苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了蓝莓组培苗生产的设施设备、外植体选取、培养基配制、外植体接种、组培苗培养、 包装、标志、运输等内容。 本标准适用于兔眼类、高丛类蓝莓的组培苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过规范性文件的引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标 准。 GB/T 8321.10 农药合理使用准则(十) GB 15569 农业植物调运检疫规程 DB33/T 179.2 林业育苗技术规程 第2部分:林业容器育苗 DB33/T 752 植物种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 外植体 explant 用于无菌培养的植物活体，包括完整植株、胚胎或从植物上切取的器官、组织等一切材料。 3.2 初代培养 primary culture 将灭菌后的外植体接种在无菌培养基中进行的第一代培养。 3.3 继代培养 subculture 初代培养获得的材料在继代培养基中不断长出新的芽或新的组培苗的培养过程。 3.4 组培穴盘苗 t issue culture hole dish plantlets 移栽在穴盘中经过一段时间培育后的组培生根苗。 3.5 组培容器苗 t issue culture container plantlets 从穴盘移栽至容器进一步培育的苗。 4 设施设备要求 1 DB33/T XXXXX—202X 拥有交通方便、环境清洁、空气干燥的实验室，主要包括，化学实验室、洗涤室、灭菌室、接种室、 培养室等；生产所需的生产设备，主要包括高压蒸汽灭菌器、超净工作台、电子天平、解剖镜、空调、 培养架、加温器、培养瓶等，以及各类化学试剂；有可供品种试验的试验地、组培苗驯化区、组培苗移 栽大棚。组培苗生产所需基本设施设备要求见附录A。 5 外植体的选取 5.1 时间 取材宜选择蓝莓两次生长高峰时期，在温暖、晴朗的天气取材，避免在冬季低温阴雨天气取材。 5.2 取材 从具有品种典型性状的健康植株上选择长势旺盛、健壮的半木质化枝条，取带芽茎段作为外植体， 未能及时接种的茎段可保湿贮藏在4 ℃冰箱中，所取的茎段应在3天内完成接种。 6 培养基的配制 6.1 母液的配制 6.1.1 基本培养基WPM 的母液配制 采用木本植物用培养基（woody plant medium，WPM）作为基本培养基，将其中所含的化学成份按 大量元素、钙盐、铁盐、微量元素、有机物等五大类分别用蒸馏水溶解后配制成质量比为1:10、1:10、 1:1000、1:100、1:100的母液，装入广口瓶后置于4 ℃冰箱保存。 6.1.2 生长激素的配制 将生产所需的玉米素(zeatin，ZT) 、萘乙酸(1-naphtahaleneacetin acid ，NAA) 、吲哚丁酸 (indole-3-butyric，IBA)用1 摩尔/升盐酸或95%酒精溶解，再用蒸馏水稀释后分别配制成200 毫克/升 的母液，装入广口瓶中，置于4 ℃冰箱保存。 以上所用药品均为分析纯级别。 6.2 培养基的配制 6.2.1 琼脂融化 按所需容量的70 %加去离子水，再加入0.7 %的琼脂，加热搅拌融化琼脂。 6.2.2 糖溶解 琼脂融化后，加入3 %蔗糖或食用蔗糖，稍加热使其溶解。 6.2.3 加母液 糖溶解后，按培养基的配方及所需数量，依次加入基本培养基WPM的大量元素、钙盐、微量元素、 铁盐、有机物及生长激素母液，并充分搅拌。 6.2.4 定容 搅拌均匀后，加去离子水至所需体积。 6.2.5 pH 值测定 2 DB33/T XXXXX—202X 充分搅拌后，用pH计