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- 2023-04-11 发布于广东
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重组DNA技术的基本操作程序
1.目的基因的获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定获取目的基因的常用方法:1.从基因文库中获取目的基因2.人工合成目的基因基因表达载体的组成:启动子+目的基因+终止子+标记基因植物细胞:农杆菌转化法(常用)、基因枪法、花粉管通道法动物细胞(受精卵):显微注射法微生物细胞:感受态细胞法检测方法:1.分子水平:DNA分子杂交法、分子杂交法、抗原-抗体杂交法2.个体水平:抗虫鉴定 抗病鉴定、活性鉴定等
一.目的基因的筛选与获取1.目的基因及结构、表达在基因工程的设计和操作中,用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因。根据不同的需要,目的基因是不同的,它主要是指编码蛋白质的基因,如与生物抗逆性、生产药物、毒物降解、工业用酶等相关的基因;也可以是具有具有调控作用的因子。
(a)原核基因表达
(b)真核基因表达
获取方法①从基因文库中获得②利用PCR技术扩增③人工合成法A.逆转录法B.化学合成法一.目的基因的筛选与获取在浩瀚的“基因海洋”中找到所需要的目的基因往往不容易,从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。随着测序技术的发展,以及序列数据库(如GenBank)、序列比对工具(如BLAST)等的应用,越来越多的基因的结构和功能为人们所知,这也为科学家找到合适的目的基因提供了更多的
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