原生质体的培养与融合.pptVIP

1973年：Keller用pH10.5的50 mM CaCl2溶液在37℃时，诱发烟草叶肉原生质体融合。 优点：杂种产量高。 不足：高pH值对细胞有毒害作用。 （二）高pH-高Ca离子法 现在是30页\一共有49页\编辑于星期二 PEG法特点： 融合频率高 可重复性强 诱发融合无特异性 毒性较低 植物+植物 植物+动物 动物+酵母 Polyethylene Glycol（聚乙二醇） （三）PEG法 现在是31页\一共有49页\编辑于星期二 PEG法原理 PEG是一种带负电性的高分子化合物，在原生质体融合中起到一种桥梁作用，可以使原生质体凝聚。在洗脱过程中，PEG将被洗掉，导致质膜表面电荷重排。粘连的质膜大面积紧密相连，电荷的重排导致一个原生质体的负性电荷部位与另一原生质体的正性电荷部位相连而导致融合。 现在是32页\一共有49页\编辑于星期二 PEG法示意图 - + - 桥梁 + - PEG被洗掉 + - + - 电荷重排 + - + - + - + - 膜接触 现在是33页\一共有49页\编辑于星期二 最为常用。 具体做法：在无菌条件下混合双亲原生质体----滴加PEG溶液，摇匀，静置---滴加高钙-高pH溶液，摇匀，静置---滴加原生质体培养液洗涤数次---离心获得原生质体细胞团---筛选---再生杂合细胞 （四）PEG结合高钙-高pH诱导法 现在是34