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- 2023-04-20 发布于陕西
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检测PCR实验室的污染情况的实验方案
实验目的:检测PCR实验室的污染情况,掌握PCR实验室的常见污染来源,制定合理的污染控制措施。
实验原理:通过对PCR实验室内不同区域的DNA样品污染程度的定量PCR检测,判断实验室的污染程度。
实验材料:
1. 无菌离心管、PCR管、PCR反应液、DNA模板。
2. 手套、口罩、实验服、护目镜、鞋套等个人防护用品。
实验步骤:
1. 选择PCR实验室内的不同区域,包括PCR反应池区、样品分离区、前处理区、否定对照区和样品储存区等。
2. 在每个区域内随机选取5个位置采集表面粘附物,采用无菌的棉签或擦拭片进行采集。
3. 将采集物放入无菌离心管内,添加100ul的PBS缓冲液进行悬浮。
4. 用PCR管取出1ul采集物悬浮液,加入PCR反应液中,运行PCR程序定量PCR检测目标序列的扩增程度。
5. 采集处理后,将PCR管集中送至PCR实验室。
6. 分析PCR结果,确定PCR实验室中各区域的污染水平。
实验注意事项:
1. 实验期间严格遵守无菌操作流程,防止外界污染影响结果。
2. 拟定实验前应充分了解PCR实验室的污染源和污染途径,有针对性地安排实验计划。
3. 对PCR实验室污染情况严重区域要采取相应的措施,如增加检查频率、加强清洁消毒等,确保实验室环境卫生。
4. 实验结束后符合规范的实验区域可使用,有异常的需消毒处理。
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