动物源性食品中金刚烷胺的检测 量子点微球荧光免疫层析法.docxVIP

动物源性食品中金刚烷胺的检测 量子点微球荧光免疫层析法 范围 本文件规定了动物源性食品中金刚烷胺残留量的量子点微球荧光免疫层析检测方法。 本文件适用于鸡肉、鸡蛋和猪肉中金刚烷胺的快速检测。 本方法检测金刚烷胺的检出限为0.1 μg/kg，定量限为0.3 μg/kg。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 31650 食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27417 合格评定 化学分析方法确认和验证指南 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 原理 本方法以量子点微球为荧光标记物，基于竞争抑制免疫层析技术原理，通过荧光信号读取仪进行数据读取和分析，根据已设定的标准曲线计算样品中待测物质的含量，对动物源性食品中金刚烷胺进行半定量或定量检测。 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯 水：应符合 GB/T 6682，二级水。 金刚烷胺标准物质：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 甲醇（CH3OH）。 乙酸乙酯(CH3COOC2H5)。 正己烷(C6H14)。 二水合磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）。 十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。 氯化钠（NaCl）。 磷酸二氢钾（KH2PO4）。 氯化钾（KCl）。 盐酸（HCl）。 氢氧化钠（NaOH）。 样本提取剂A：称取8.0 g氯化钠（5.8）、0.2 g磷酸二氢钾（5.9）、0.2 g氯化钾（5.10）、2.9 g十二水合磷酸氢二钠（5.7），加入约500 mL水（5.1）溶解，再加入盐酸（5.11）溶液0.5 mL，加水（5.1）定容至1 L。 样本提取剂B：称取20.0 g氢氧化钠（5.12），加入约900mL水（5.1）溶解混匀，定容至1 L。 样本复溶液磷酸盐缓冲液（10 mmol/L，pH 7.4）：称取8.0 g氯化钠（5.8）、2.77 g十二水合磷酸氢二钠（5.7）、0.352 g二水合磷酸二氢钠（5.6），用水（5.1）溶解并定容至1 L。 金刚烷胺标准品储备液（100 μg/mL）：准确称取10 mg（精确至0.01 mg）金刚烷胺（5.2）于烧杯中，用甲醇（5.3）溶解后转移至100 mL容量瓶中，用甲醇（5.3）稀释至刻度，摇匀。-20℃冷冻避光保存，有效期3个月。 仪器和设备 分析天平：感量分别为0.01 g和0.01 mg。 微量移液器：20～200 μL、100～1000 μL和1～10 mL。 旋涡混合器：转速≥2500 r/min。 恒温孵育器：设定温度误差不超过±1度。 荧光免疫分析仪：激发波长为365±5 nm，发射波长为610±5 nm。 样品浓缩仪：设定温度误差不超过±1度。 搅碎机：转速≥5000 r/min。 离心管：1.5 mL和50 mL。 金刚烷胺量子点微球荧光免疫层析快速检测试剂盒（一般含检测卡和ID卡，内设对应批次标准曲线）。 试样制备 试样准备 称取约200 g具有代表性的禽肉组织样品，充分均质混匀，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记。留样置于-20℃保存。 试样前处理 准确称取试样2 g（精确至0.01 g）均质样本于50 mL离心管中。 加入2 mL样本提取剂A（5.13），涡旋振荡2 min，加入1 mL样本提取剂B（5.14），涡旋振荡30 s，最后加入4 mL乙酸乙酯（5.4），手动振荡混匀30 s，静置1 min，待溶液分层。 准确吸取2 mL上清液于10 mL离心管中，于65℃用样品浓缩仪（6.6）吹干。 加入1 mL正己烷（5.5），完全溶解后再加入500 μL样本复溶液（5.15），轻轻颠倒混匀，确保离心管壁上的残留均能被样本复溶液混匀（请勿振荡）。 静置1 min，溶液分层后吸取下层液体用于检测。 注：不同厂家检测卡所用的样品前处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进行操作。 检测步骤 测试前打开荧光免疫分析仪（6.5），确认试剂盒中的ID卡与试剂盒的批号是否匹配后插入ID卡，在仪器测试界面点击“读ID卡/读项目”，界面出现“读取完成”，点击“确认”即可使用。 将恒温孵育器（6.4）开机，待温度升至37℃即可使用。 从包装铝箔袋中取出检测卡，在半小时内使用。 将检测卡平放，用微量移液器吸取90 μL稀释后的待测液于检测卡的加样孔（S）中，在恒温孵育器中37℃孵育反应10 min。 反应时间结束后立即将检测卡插入读取仪中，点击仪器界面的“测试”，仪器会自动给出定量测试结果，15 min后测试无效。 注：不同厂家读卡仪所用仪器界面设置可能