质粒转化大肠杆菌.pptVIP

质粒转化大肠杆菌; 1、重组质粒的鉴定 当质粒的重组或其他载体重组后，通常会发生质粒的重组失败，包括质粒的本身环化。因而要求进行筛选，把重组成功的质粒找出来。 在目前常用的质粒和其他载体中含有相应的抗生素抗性基因，若重组成功，或不含质粒的自身环化，抗生素抗性基因表达，被转化的大肠杆菌便具备抵抗相应抗生素的能力，可以在含该抗生素的培养基上生长传代。若重组失败，大肠杆菌便不能抵抗该抗生素而死亡。 2、为扩增质粒和其他载体作准备 由于大肠杆菌繁殖快，在适宜的条件下繁殖一代仅需要20-30min，而且常用质粒可以在大肠杆菌中增殖达到几百个拷贝。因此，通过对转化成功的大肠杆菌培养，可以在短时间内极大的扩增目的质粒。;二、实验原理;三、实验流程：;四、实验方法---冻融法;1、无菌落，失败，或培养条件不充分。 2、菌落布满如苔样，失败，可能是抗生素浓度不够或失效。 3、菌落布满，抗生素浓度太高，失败。 4、出现菌落，符合要求。;五、结果分析和失败原因;1、平板中的抗生素部分失效，长出的克隆是杂菌。 2、倒Ka平板时，培养基太烫，应冷却到50℃以下加Ka抗生素。 2、涂板时来回用力过大，涂布环或者涂布棒灼烧过热，或不待冷却就涂布。 3、感受态细胞长时间处在常温状态，会严重影响其转化，操作时动作迅速。 4、操作时动作过于剧烈，减少对细胞的机械损伤。切记感受态细胞比较娇嫩。