测定饲料中粗蛋白影响因素的探讨.docVIP

测定饲料中粗蛋白影响因素的探讨 摘要:随着饲料工业的快速发展，饲料产量迅速增长，饲料中粗蛋白质含量的测定显得日益重要，虽然粗蛋白测定无法鉴别三聚氰胺和尿素等物质，但是在目前条件下，饲料中粗蛋白的测定仍然是评价饲料营养价值的里要指标，本文根据测定粗蛋白的过程中的各个步骤分别研究了饲料中粗蛋白测定中消化温度、消化时间、不同催化剂及催化剂用量、硼酸吸收液、蒸馏时间、酸浓度等对粗蛋白测定的影响,并对凯式定氮法中的一些注意事项进行了讨论。为饲料中粗蛋白测定人员提供参考。 关键词:粗蛋白测定，消化时间，催化剂，酸浓度，蒸馏时间 原理 国标法测定试样中含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化为硫酸铵，加入碱进行蒸馏使NH3逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白的含量。 一消化温度及消化时间对饲料粗蛋白测定结果的影响 1.1消化温度 消化过程采用全自动凯氏定氮仪自备消化装置，样品消化之前用浓硫酸浸泡过夜，升温过程时在200摄氏度保待1小时，并保持经常晃动可消除消化时泡沫泡沫飞溅现象，国际上消化温度为360?-410?，实际消化时可根据实际样品采用420?，但是消化温度不能超过450?，否则蛋质会有部分分解。 1.2消化时间的影响 消化时间对饲料中粗蛋白的测定尤为重要，消化时间太短，饲料中的氮不能允分转化成氨;消化时问过长,会造成氨的损失，实验了消化时间对粗蛋白测定的影响,如表1所示。 表1消化时间对相蛋白測定的影响 消化时间/h 0.5 1 2 3 4 5 粗蛋白含量/% 42.2435 45.6686 45.8747 45.9295 46.1413 46.2052 样品变绿后消化0.5h蛋白含含量偏低，随着消化时间的增大,蛋白含量逐渐的增加，从2h幵始,蛋内含量增加缓慢，2h的和5h的蛋白含量在允许的1%误差范闱之内，可见样品消化时间最好控制在样品变绿后2h以上，对一般样品，3-4h的消化时间已经足够,过长的消化时间对蛋白含的提高没有显著的影响,反而会造成时间和资源的浪费。 1.3粗蛋白测定中的自我校正 样品测定之前需用纯度,99.5%的硫酸铵(含氮量21.09%)做回收率进行校正:称取0.15 -0.2(精确到小数点后第四位)硫酸铵，代替样品同样的分析步骤操作，回收率必须在99.5%-100%之间。如果回收率偏大或者偏小则要检查各个步骤有没有错误，回收率满意后再做实际样品可避免时间和资源的浪费。 二催化剂对饲料粗蛋白测定结果的影响 2.1催化剂用量 催化剂的作用是提高硫酸沸点,加快有机物分解，但是催化剂的用量也有严格限制，含量太低，消化温度偏低，有机物分解速度缓慢，含量太大消化溫度过高容易造成氮的损失。实验中发现催化剂含量为6.4g时,样品从420?开始至变绿时间在20分钟左右，而催化剂含世为3.2g的相同质量的样品从420?消化至变绿需要大约50分钟，而不含催化剂的样品从420?开始消化4h样品仍未变绿。由此可见催化剂含试对消化速度的影响非常显著。福斯公司推荐硫酸和催化剂用量之比为1.4:2，对高消耗酸的样品，如高脂肪含量的样品。 到2.5-2.8之间。国标规定6.4g催化剂对12ml硫酸可满足大部分样酸、盐的比例可以达 品的需求，如果要增加酸碱的量，可适当对催化剂进行相应调整,同时蒸馏时碱的用量也要进行相应得调整。 2.2不同催化剂的影响 称取0.4000 g左右经旋风式样品磨粉碎、过40目分析筛筛底的样品加于烧瓶中,样品混合均匀后装上回流冷凝管,关闭排液活塞,插上加液漏斗,加入浓硫酸15mL(加入浓硫酸后加液漏斗不取下,但要关闭活塞) 加浓硫酸后,加入3粒玻璃珠, 再加3,5mL30%的过氧化氢溶液到加液漏斗上。摇匀后,把一特制的冷凝管套入,分别接好进水和出水口的乳胶管, 再把烧瓶放入电热套中, 在上部用万用夹把冷凝管与铁架台固定好, 接通水源,打开电热套,先用小火炭化,再用大火消化,当看到瓶口冒白烟、消化液成为酱紫色的时候,调小火力。同时, 调开加液漏斗的活塞, 让过氧化氢溶液慢慢滴加到消化液中。直到消化液呈清澈透明时停止滴加过氧化氢溶液。然后,再恒温1,2min停火,冷却取下烧瓶,将样液移到50 mL容量瓶中待用。同一样品按上述方法,用不同的催化剂、不同的消化方法, 消化出不同的系列备用。同时做空白实验。 2.2.1样品测定 2.2.2 定容将消化好冷却至室温的消化液分别全部转移到100 mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,备用。 2.2.3 分别取消化好的样品液10ml置于凯氏蒸馏瓶中,加40 %的氢氧化钠溶液5,10 mL, 加热蒸馏, 用盛有1%硼酸10mL加有混合指示剂(2滴)的三角锥瓶来吸收蒸馏出来的氨。蒸馏变色约