细菌总数的测定.docxVIP

细菌总数的测定水与人类的生产活动和日常生活息息相关。经济建设的高速进展，往往会使生活 用水的水源水受到水中有害有毒物质的污染；而生活污水、人、畜粪便会使甚或 用水的水源水受到腐生性微生物的污染。被污染的水都不宜饮用。当水体中含大 量的病原问生物是往往会引起传染病的发生，人体和动物体的肠道中大约有400 多种细菌，虽然，其中的腐生菌进入水体不会引发人类的疾病，但随着粪便一起 排解的致病菌，如霍乱弧菌、伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、阿米巴虫、脊髓灰 质炎病毒和传染性感染病毒等致病性微生物，则会引发人体的肠道传染病。为爱 护人体健康，防止因水源水污染而造成的疾病发生和流行，必需对生活用水及其 水源水进行严格的水中细菌学检查。 测定水样是否合乎引用标准，一般包括：水中细菌总数测定和大肠菌群测定。 本试验以自来水和自然 水为水样进行细菌总数的测定一、试验目的 （1）学习水样的实行和水样中细菌总数测定的方法（2） 了解和把握平板菌落计数的原则 二、试验原理水中的细菌数可反映出水体被有机物污染的程度。细菌总数越多，说明水中有机 物的含量就越高，本试验应用平板菌落计数来测定水样中的细菌总数。由于水中 细菌的种属不一，它们对养分成分和生长条件的要求差别很大，不行能设计出一 种培育基在同一固定的条件下，能满意水中全部细菌的养分要求使其都能生长繁 殖，形成菌落。然而，肠道中的绝大多数腐生性和致病性的细菌，可在养分丰富 的牛肉膏蛋白豚培育基上进行生长，消失肉眼可见的菌落，虽然这样设计出来的 水中细菌的总数实际上是一种近似值，但它基本上能代表水样中细菌的数量。故 而水中的细菌总数的测定和计算是指：在牛肉膏蛋白陈琼脂培育基上，1ml水样, 经37℃, 24h培育后所生出来的总菌数（包括腐生和致病细菌），我们国家饮用 水的卫生学指标规定：在1ml自来水中细菌总数不得超过100个（1 X102）o三、试验材料和用具 （1）培育基 牛肉膏蛋白陈琼脂培育基（2）用具 灭菌三角烧杯（体积为50ml或100ml）,具玻塞的试剂瓶（体 积为250ml,需灭菌），灭菌培育基（中=9cm ）,灭菌吸管或灭菌的塑料吸嘴，稀释水样用无菌水（在中16mm X 160mm试管中加9ml 蒸储水，灭菌），酒精四、试验方法 （I）以无菌操作、用10倍稀释法稀释水样。 （2）用平皿倾注制备待测水样平皿。 五、试验内容1、水样的实行 （1）自来水 先将自来水龙头用火焰（酒精灯火用长柄镶子夹酒精棉球）灼烧 2-3min灭菌，再开启水龙头水水流出5min。以灭菌三角烧杯接取水样，待测（为 节省用水，自来水龙头一次灭菌后，试验者依次实行水样）。 （2）池塘水、河水或湖水 应取距水面10-15cm的深层水样。先将已灭菌具玻 璃的试剂瓶，瓶口向下浸入水中，在水中翻转式瓶口向上，开启瓶塞，待水盛满 后，在水中将瓶塞盖好，再取出水面。取样后应马上进行试验。如不能立刻进行 试验，应于4℃冰箱保存。 2、细菌总数测定 （1）自来水（以下操作均需用无菌操作法进行）①用灭菌吸管或微量家养器吸取1ml水样，注入灭菌培育中，共做2个平皿。 ②分别向平皿中倾注15-20ml熔化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋白月东琼脂培育 基，制成平板，并马上轻轻摇匀（切忌溅到皿盖上），使水样于培育基充分混合。 ③取另一平皿，只加培育基，不加水样，作为空白对比平板。 ④待培育基充分凝固后，倒置于37℃温箱内，培育24h,进行菌落计数。 ⑤2个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。 （2）池塘水、河水或湖水 ①水样稀释。取1ml水样水加入到第一支装有9nl无菌水的试管中，振荡匀 称，水样被稀释10倍，稀释度为IO」，再从今管中吸取1ml稀释水样介入 到其次支装有9ml无菌水的试管中，振荡匀称，水样被稀释100倍，稀释度 为10-2,如此稀释则水样被稀释1000倍，10000倍……稀释度分别为10-3、 10、……。稀释倍数视水样污浊程度而定，中度污浊水样可稀释到10-3~10一4, 中度污浊水样可稀释到10-4~10-5。 ②吸取稀释后水样 方法1：用无菌吸管或微量加以昂起分别从低稀释度向高稀释度吸取1ml水 样,即10；（1ml） -10-2（iml） f 10-3（iml）,每一稀释度需用一支无菌吸 管或塑料吸嘴，不行用同一吸管连续吸取,不然,培育后消失的菌落数偏高， 误差大。 方法2：用同一无菌吸管或微量加样器，可从高浓度向低浓度连续吸取1ml 水样，即 10-3（iml） f IOj祥m|）（1ml）,由于高稀释度 比 1（）-2 的菌数少，用同一吸管逐次连续吸取1mL培育后的菌落数，偏差不大， 此法快速，简便。 ③向每一个加油不同稀释度水样的平皿内，倾注15-20ml培育基，混匀，每 个稀释度做2皿，计数时取2个拼版菌落数的