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三有机酸的学习课件第1页/共12页第2页/共12页第3页/共12页一、柠檬酸发酵生产工艺（一）柠檬酸合成途径柠檬酸又名枸橼酸，学名α-羟基丙烷三羧酸，是生物体主要代谢产物之一。 柠檬酸合成途径： 丙 乙酰COA葡萄糖 酮 →柠檬酸 酸 草酰乙酸氧化脱羧EMP羧化第4页/共12页（二 ）柠檬酸生物合成的代谢调节1、糖酵解及丙酮酸代谢的调节 1）在正常情况下，柠檬酸、ATP对磷酸果糖激酶有抑制作用，而AMP、无机磷、铵离子对该酶则有激活作用，特别是还能解除柠檬酸、ATP对磷酸果糖激酶的抑制作用。 2）比较底物锰充足、锰缺乏时分批培养物的最大活力时发现，锰缺乏时黑曲霉的组成（合成）代谢受损伤，这与柠檬酸的积累有关。 3）丙酮酸激酶是EMP途径的第2个调节点，在某些真菌得到证实，但黑曲霉未被证实。第5页/共12页（二 ）柠檬酸生物合成的代谢调节2、柠檬酸生物合成代谢调节的特点： 1）TCA环的起始酶：柠檬酸合成酶是一种调节酶。但在黑曲霉中，柠檬酸合成酶没有调节作用，这是黑曲霉TCA环的第一个特点。 2）第二个特点：黑曲霉菌体内α-酮戊二酸脱氢酶缺失或活力很低（TCA环被阻断）。 3）氧和pH值对柠檬酸发酵的影响很大。第6页/共12页（二 ）柠檬酸生物合成的代谢调节3、柠檬酸积累的原因：①Mn2+缺乏→抑制蛋白合成→NH4↑ 有一条呼吸活动强的不产生ATP的侧呼吸链；②由于丙酮酸羧化酶是组成型酶，不被调节控制。丙酮酸氧化脱羧生成乙酰CoA和CO2的固定两个反应的平衡，以及柠檬酸合成酶不被调节，增强了合成柠檬酸的能力。③由于顺乌头酸水合酶在催化时建立了以下平衡： 柠檬酸：顺乌头酸：异柠檬酸=90：3：7 同时控制Fe2+含量时，顺乌头酸酶活力降低，使柠檬酸积累。④随着柠檬酸积累，pH降低到一定程度时，使顺乌头酸酶和异柠檬酸脱氢酶失活，更有利于柠檬酸的积累及排出细胞外。第7页/共12页（三）柠檬酸发酵生产工艺第8页/共12页（三）柠檬酸发酵生产工艺 1、菌种： 黑曲霉。2、一级种子培养： 麦芽汁琼脂斜面，35±1℃，培育5天； 麸皮三角瓶， 35±1℃，培育10天； 转种子罐。第9页/共12页（三）柠檬酸发酵生产工艺3、种子罐培养：培养基：玉米淀粉水解糖+淀粉水解滤渣；空消：种子罐、分过滤器，130℃，30分；实消：列管加热至80℃，直接进蒸汽至125℃， 15-20分；接种：冷却至35±1℃，接麸曲种1‰；培养： 35±1℃，罐压：0.1Mpa，风量： 1：0.1- 0.16，时间16-30小时。第10页/共12页（三）柠檬酸发酵生产工艺4、发酵：培养基：玉米淀粉水解糖；空消：发酵罐、分过滤器，130℃，30分；实消：列管加热至80℃，直接进蒸汽至125℃， 15-20分；接种：冷却至35±1℃，接种子罐菌种10％；培养： 温度：35±1℃， 罐压：0.1Mpa， 风量：1：0.1- 0.15，时间：50-60小时。第11页/共12页二、柠檬酸提取生产工艺1、发酵液过滤： 带式过滤机2、中和： 滤液中除含柠檬酸外，还含可溶性的残 糖以及蛋白质、金属离子等杂质。利用柠檬酸钙难溶于水的特点，与杂质分离的过程。3、酸解： 中和所得钙盐经过滤、洗涤，与硫酸反应生成柠檬酸和硫酸钙沉淀，过滤，滤液含较纯的柠檬酸。第12页/共12页感谢您的欣赏黑曲霉在限制氮源和锰等金属离子条件下，同时在高浓度葡萄糖和充分供氧的条件下，TCA循环中的α－酮戊二酸脱氢酶受阻遏，TCA循环变成“马蹄形”，代谢流汇集于柠檬酸处，使柠檬酸大量积累并排出菌体外。