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第1页/共28页人教动物细胞工程课前练第2页/共28页（一）动物细胞培养概念：组织从动物机体中取出相关的 ，将它分散成 ，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞 。单个细胞生长和增殖过程：第3页/共28页组织块剪碎 从健康动物体内取出 ， ，用 酶或 酶处理一段时间，这样组织就会分散成 。然后，用 将分散的细胞稀释制成 ，再将其放入培养瓶内，置于适宜环境中培养。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为 。这要求培养瓶或培养皿的内表面 、 ，易于贴附。当贴壁细胞分裂生长到表面相互 ，细胞就会停止分裂增殖，该现象称为 。胶原蛋白胰蛋白单个细胞培养液细胞悬液细胞贴壁光滑无毒接触接触抑制第4页/共28页胰蛋白酶传代1010—50缓慢停止细胞核型不死性10二倍体核型原代培养通常将动物组织消化后的初次培养称为 。贴满瓶壁的细胞需要重新用 等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程称为 培养，这样的细胞一般传至 代后就不易传下去了。一般来说，细胞传至 代左右时，增殖会逐渐 ，以至于完全 ，这时部分细胞的 可能会发生变化。继续培养时，少部分细胞获得 ，朝等同于癌细胞的方向发展。目前使用的或冷冻保存的正常细胞为 代以内，以保持正常的 。第5页/共28页动物的组织器官剪碎胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）分散成单个细胞制成细胞悬浮液原代培养传代培养10代、细胞核型发生改变传代培养遗传物质改变过程小结：第6页/共28页条件：无菌1、 、 环境无毒无菌对培养液和所有培养用具进行 处理；抗生素还要在培养液中添加一定量的 ，以防止污染。还应定期更换培养液，以便清除代谢产物。2、营养物质水、无机盐、微量元素、葡萄糖、氨基酸、促生长因子、动物血清等第7页/共28页 36.5+0.50C温度：3、温度和PHPH:7.2~7.44、气体环境95%空气和5%CO2供给细胞代谢所必需的O2维持培养液的PH第8页/共28页动物细胞培养的应用１、大规模生产有重要价值的生物制品。疫苗、干扰素、单克隆抗体等２、解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。　　３、检测有关物质毒性。４、用于基因工程。第9页/共28页比较项目培养目的原 理培 养 基结 果植物组织培养动物细胞培养比较动物细胞培养和植物组织培养固体培养基、营养物质、植物激素等快速繁殖，培育无病毒植株等细胞的全能性植物体液体培养基、营养物质、血清、血浆等获得细胞的产物或细胞等细 胞增 殖细胞第10页/共28页概念：细胞杂交也称_________，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为_______。杂交细胞（二）动物细胞融合第11页/共28页过程:动物细胞B动物细胞A物理法诱导融合化学法生物法：（最常用）灭活的病毒杂种细胞第12页/共28页原理：细胞膜的流动性有性杂交突破了 方法的局限，使 _______杂交成为可能优点:远缘单克隆抗体应用：制造 .遗传免疫研究细胞 、细胞 、肿瘤和生物新品种 等的重要手段。意义：育种第13页/共28页（三）单克隆抗体 长期以来，人们为了获得抗体，采用的方法是向动物体内注射某种 ，使动物产生 ，然后从动物血清中分离所需的抗体。这种方法不仅产量 、纯度 ，而且制备的抗体特异性 。抗原抗体低低差第14页/共28页病原体 哺乳动物感染 （如病毒、细菌等），体内会形成相应的 细胞，这种细胞能分泌抗体，凝聚和杀死这些病原体。动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性 种类可达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌 特异性抗体，而且B淋巴细胞是 无限增殖的。B淋巴抗体一种不可能第15页/共28页第16页/共28页注射抗原小鼠培养的骨髓瘤细胞制备单克隆抗体的过程骨髓瘤细胞Ｂ淋巴细胞融合多种杂交细胞筛选培养基培养杂交瘤细胞小鼠体内注射单克隆抗体筛选能产生专一抗体的杂交瘤细胞体外培养第17页/共28页抗原 用 对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，从免疫反应小鼠的脾脏细胞中提取相应的 细胞，再设法与骨髓瘤细胞融合，再用特定的 培养基进行筛选。在该培养基上， 的亲本细胞和 具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的 细胞才能生长。这种 细胞的特点是既能迅速大量 ，又能产生 。B淋巴选择性融合的未融合杂种杂种繁殖专一的抗体第18页/共28页杂交瘤 对上述经选择性培养的_____细胞，还需进行_____培养和____检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需____的细胞。最后，将______细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠的腹腔内增殖，这样，就可以提取出大量的______________.克隆化抗体抗体杂交瘤单克隆抗体第19页/共28页特点：特异性强、灵敏度高，并可大量制备。应用：诊断1、作为体外 试剂； 由于纯度高、特