双缩脲法测定蛋白质浓度.docxVIP

双缩脲法测定蛋白质浓度 ――生物化学实验 一、目的 了解并掌握双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和方法。 二、原理具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应(蛋白质分子中有-CS-NH2-CH2-NH2,-CHNH2CH2OH等基团，这些基团亦可与碱性高价铜呈颜色反应)，在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色配合物，在540m处有最大吸收。在一定浓度的范围内，蛋白质浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比，可用比色法定量测定。 双缩脲法最常用于需要快速但不要求十分精确的测定。硫酸铵不干扰此呈色反应，但Cu2吊子容易被还原，有时会出现红色沉淀。 三、实验仪器 容量瓶10ml(X6)。 试管1.5cmX15cm(X8)。 吸管5.0ml(X3)、2.0ml(X1)。 722型(或7220型)分光光度计。 四、实验试剂 1、双缩脲试剂：将0.175gCuSO4-5H20溶于约15ml蒸馏水，置于l00ml容量瓶中，加入30ml浓氨水30ml冰冷的蒸馏水和20ml饱和氢氧化钠溶液，摇匀，室温放置1?2h，再加蒸馏水至刻度，摇匀备用。 2、卵清蛋白液：约lg卵清蛋白溶于l00ml0.9%NaCl溶液，离心，取上清液，用克氏定氮法测定其蛋白质含量。根据测定结果，用0.9%NaCl溶液稀释卵清蛋白溶液，使其蛋白质含量为2rng/ml。亦可用2mg/ml的牛血清白蛋白溶液。 3、未知液：可用酪蛋白配制。 五