红细胞计数红细胞形态检查血红蛋白测定.pptVIP

;红细胞计数、红细胞形态检查、血红蛋白测定;目的要求;重点 :红细胞计数、血红蛋白测定的原理、血片 红细胞形态、 难点:红细胞检验的形态、质控。;一、概 述;1.红细胞的生成;2.红细胞的破坏;二、红细胞计数;红细胞计数（red blood cell count,RBC）即测定单位体积内红细胞数量。是血液一般检验的基本项目，常作为诊断贫血和红细胞增多的主要指标之一。;（一）显微镜计数法;【器材】 微量吸管，采血针，小试管，计数板，盖片，棉球，显微镜。 【试剂】红细胞稀释液：任选一种 1.Hayem稀释液：氯化钠1.0g、硫酸钠（含10个结晶水）5.0g，氯化高汞0.5g，蒸馏水加至200mL，过滤后使用。 氯化钠---调节渗透浓度 硫酸钠---提高比重防止红细胞粘连 氯化高汞---防腐剂，有毒 ;2.柠檬酸盐甲醛盐水 氯化钠 0.6g 调节渗透压 柠檬酸钠 1.0g 调节渗透压，抗凝 36%甲醛 1ml 防腐 蒸馏水加至100ml，过滤2次后使用。 3.生理盐水或加1%甲醛的生理盐水;【操作】 1.中号试管（15×100mm）加等渗稀释液2ml； 2.毛细血管采末梢血10μl加入上述稀释液，立即摇匀（稀释200倍）； 3.充池，静置2min后以低倍镜计数中间大方格内四角和中央5个中方格内的红细胞数。 ;红细胞计数; 3mm WBC WBC WBC WBC 1mm;红细胞数/L=5个中方格内红细胞×5 ×10 ×200 ×106/L 或 = ×1012/L;【方法学评价】 1．手工显微镜法 2．血液分析仪法 为目前主要临床检验细胞计数方法 变异系数（coefficient of variation, CV ）小。 ;【质量控制】 1．手工法 误差来源包括：标本、操作、器材、固有误差（计数域误差） 2．仪器法 严格按操作规程；定期作室内和室间质控。 ;【参考值】 男性 : （4.00-5.50） × 1012/L 女性 : （3.50-5.00） × 1012/L 新生儿:（6.00-7.00） × 1012/L;【注意事项】 1.采血及摇匀迅速，防止血液凝固； 2.器械应防酸防碱且干燥； 3.充池要摇匀； 4.计数时，应识别酵母及白细胞。;三、血红蛋白测定;（一）血红蛋白的结构;空间结构：每个血红蛋白有4条珠蛋白肽链， 每条肽链包裹1个亚铁血红素，形成具有 四级空间结构的四聚体。 ;【分类】（每个珠蛋白分子含两条α 链和两条非α 链） 正常人：HbA （ α2β2） 占90% 成人主要血红蛋白； HbA2（ α2δ2 ） 占2%-3% 成人次要血红蛋白 HbF （ α2γ2 ） 占2%以下 胎儿主要血红蛋白 ;生理情况下，99%Hb的铁呈Fe2+状态，称为还原血红蛋白，亚铁状态的Hb与氧结合称氧合血红蛋白（HbO2). 1%Hb的铁呈Fe3+状态，称为高铁血红蛋白（Hi）。 ;注意事项：1. 如α-链或β-链合成障碍，使三种正常血红蛋白比例异常，即各型地中海贫血；如多肽链发生氨基酸置换、丢失、加长，称为血红蛋白病 。 2.病理情况下可出现硫化血红蛋白（SHb）。 ;（二）血红蛋白衍生物及其吸收光谱 ;4.碳氧血红蛋白（HbCO）、硫化血红蛋白（SHb）：与O2结合的配位键被CO、S等占据。 5.氰化高铁血红蛋白（HiCN）：Hi与CN-结合而成。波峰540nm，波谷504nm。;（三）血红蛋白测定方法;1、氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法;2）器材： 分光光度计、移液管、微量吸管、试管等。 3）试剂：血红蛋白转化液（文齐液）成分如下 ①高铁氰化钾：使Hb转化成Hi ②氰化钾：使Hi形成HiCN ③无水磷酸二氢钾：防止混浊，调节pH值 ④TritonX100:非离子型表面活性剂，加速溶血，缩短转化时间，防止因血浆蛋白改变引起的混浊。 ;4）操作： a. 取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静置5分钟。 b. 用分光光度计比色。波长540nm，以空白转化液调零，测定吸光度“A”。;5）计算 ①标准状态下的计算 Hb（g/L）=A× ×251＝A