DB15T 2967—2023内蒙古绒山羊精液低温保存技术规程.docx

ICS 6g.0Z0.:0 CCS 日 v0 内 蒙 15 古 自 治 区 地 方 标 准 0日Lg/T Z66L—Z0Z: 内蒙古绒山羊精液低温保存技术规程 T?o+nioel sd?oi}ioe才ion on oolp s才oAeZ? o} lnn?A MonZolie oes+m?A? Zoe才 s?m?n Z0Z:-0v-Z6 发布 Z0Z:-0g-Z6 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分： 标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会(SAM/TC 19) 归口。 本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古金莱牧业科技有限责任公司。 本文件主要起草人： 张家新、王瑞军、刘燕、何利兵、张燕军、苏蕊、王志英、李金泉。 内蒙古绒山羊精液低温保存技术规程 1 范围 本文件规定了内蒙古绒山羊精液低温保存过程中的精液采集、精液处理、精液保存和贮存、运输等 内容。 本文件适用于内蒙古绒山羊精液低温保存。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件； 不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本 文件。 GB 20557 山羊冷冻精液 NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 精子活力 sperm motility 精液中直线前进运动的精子数占总精子数的百分比。 精液低温保存 semen cold storage 将稀释好的精液保存于0 ℃~5 ℃的环境中。 4 采精用品清洗和消毒 方法参照按照NY/T 1234执行。 5 稀释液配制 稀释液配方见附录A。 6 采精 采精准备 6.1.1 场地 采精场地要保持平整、清洁、安静、遮光、无异味并进行定期消毒。室温控制在15 ℃~20 ℃。 6.1.2 台羊 选择健康的发情母羊做台羊，并用保定架进行保定。 6.1.3 假阴道 按照GB 20557执行。 采精 按照GB 20557执行。 7 精液处理 颜色 观察集精试管中精液的颜色，正常的精液颜色为乳白色或浅黄色。 密度测定 用密度测定仪检测精液的密度， 并记录。精子密度高于10 亿个/mL可用于后续稀释保存操作。 活力测定 活力不小于70%可用于稀释保存操作， 活力检测方法按照GB 20557执行。 精液稀释 采精1 h前，将稀释液放入37 ℃的水浴锅中预热。采精后，将密度、活力均合格的精液使用稀释液 按体积比先进行1:2等温稀释，随后将稀释完的精液按1:5进行二次稀释，使最终的精液：稀释液为1:10。 8 精液保存 分装 将稀释好的精液分装于15 mL的离心管中，每管分装2 mL~3 mL，拧紧旋盖，在离心管上标记品种、 羊号、生产日期或批号。 降温处理 将分装了精液的离心管放置在加有500 ml水、 37 ℃的水浴烧杯中，然后放入0 ℃~5 ℃冰箱中缓 慢降温，并保存。 保存精液的活力检测 保存期间每隔24 h在0 ℃~5 ℃环境中轻摇稀释精液，并检测精子活力。用移液枪小心吸取混匀 后的精液50μL，并放入1.5 mL离心管内，置于37 ℃的水浴锅中回温2 min，按照GB 20557进行活力检 测。活力低于60%则不能用于输精。 9 贮存、运输 在精液贮存、运输过程中，一定确保温度维持在在0 ℃~5 ℃，避免在运输过程中的振动。 附 录 A (资料性) 稀释液配方 A.1 配制低温保存稀释预备液 Tris 18 g，葡萄糖5 g，柠檬酸10 g，果糖7.5 g，NaHCO3 0.65 g，HEPES 0.6 g，ATP 4 g溶于 300 mL超纯水，搅拌20 min，再加入超纯水定容至500 mL。然后用0.22 ?的过滤器过滤， 在0 ℃~5 ℃ 条件下可保存3个月。 A.2 配制低温保存稀释液 取低温保存稀释预备液90 mL，添加10 mL鸡蛋卵黄液，青霉素5000IU, 链霉素10000 mg，用搅拌器 搅拌15 min，5 ℃条件下静置12 h，再2800 g、10 min 离心。然后用0.45 ?的过滤器过滤上清液，在 在0 ℃~5 ℃条件下可保存2周。