MTT法检测细胞活力精讲.pptxVIP

MTT法目的和意义;原理; ;贴壁细胞操作步骤; 4. 每孔参加10ul MTT溶液〔5mg/ml，即0.5%MTT〕，继续培养4h。假设药物与MTT能够反响，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再参加含MTT的培养液。 5. 终止培养，小心吸去孔内培养液。 6. 每孔参加100ul二甲基亚砜〔置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。 7.同时设置调零孔〔培养基、MTT、二甲基亚砜〕，对照孔〔细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜〕 ;悬浮细胞操作步骤：;药物的配制;MTT的配制;实验结果统计学处理;实验结果统计学处理;举例;本卷须知;实验前应明确的问题;2.药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否那么，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。 3. 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了〔到了平台期〕那个时间点应该就是最好的时间点〔因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显〕。;4.培养时间。100ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向