枯草芽孢杆菌实验报告.docx

微生物技术综合实验 年 级： 13 级生物工程（专升本） 班学 级： 号： 名： 2013011201 指导老师： 日 期： 刘凤霞 教授二零一三十月五号 目 录 实验目的及原理… 1 实验目的 1 实验原理 1 实验材料… 1 实验仪器 1 实验试剂 1 培养基 2 生长培养基… 2 鉴定培养基… 2 摇瓶培养基… 2 试验方法… 2 仪器的准备 2 培养基的配置 2 初步筛选及鉴定 2 采集土样… 3 富集培养… 3 稀释分离、纯化… 3 3.3.4 初筛… 3 复筛及鉴定… 4 革兰染色… 4 酶活力的测定… 4 摇瓶培养… 4 酶液稀释… 4 酶液测定… 4 结果分析 5 平板涂布分离… 5 平板划线分离… 5 4.3 初筛… 5 4.4 复筛… 5 摇瓶培养… 6 酶活力测定… 6 参考资料… 7 6 附录… 8 微生物上游技术综合实验 微生物上游技术综合实验 枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定 枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定 PAGE PAGE 5 PAGE PAGE 8 枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定 实验目的及原理 实验目的 学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。 学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。 掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。 培养学生综合应用微生物实验方法的能力。 培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。 实验原理 选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。故在淀粉部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断培养物中是否有产淀粉酶微生物及产淀粉酶的能力。 实验材料 实验仪器 无菌玻璃涂棒 无菌移液管 接种环 无菌培养皿 土样 电子天平 三角瓶 烧杯 试管 酒精灯 擦镜纸 载玻片 吸水纸 恒温摇床 恒温培养箱 高压蒸汽灭菌锅玻璃珠 显微镜 无菌铲 胶头滴管 记号笔 试管架 棉塞 牛皮纸 报纸 细绳无菌纸袋 电炉 搪瓷缸 分光光度计 恒温水浴锅 白瓷皿等。 实验试剂 ○ ○1 碘液储备液：称取 22.0g 碘化钾溶于约 300mL 水中，加入 11.0g 碘，搅拌溶液， 移入 移入 500mL 容量瓶，用水定容，贮于棕色瓶中备用（每月配制一次）。 ○2 碘液使用液：称取 20.0g 碘化钾，溶于约 300mL 水中，移入 500mL 容量瓶中， 准确加入 准确加入 2.00mL 碘液储备液，用水定容，贮于棕色瓶中备用（每天配制一次）。 ○3 20g/L 可溶性淀粉溶液：称取 2.00g 可溶性淀粉于 250mL 烧杯中，用少量水调成 糊状，在搅拌下加入约 80mL 沸水，继续加热煮沸至透明（20min），冷却后用水定容至 100mL（此溶液需当天配制，存放冰箱备用） ○4 pH6.0 磷酸缓冲溶液：称取磷酸氢二钠 45.23g，柠檬酸 8.07g，用水溶解定容至 1000mL，配好后用酸度计校正其 pH 至 6.0 ○5 0.1mol/L 盐酸溶液：量取 9.4mL 浓盐酸，用水稀释定容至 1000mL。 草酸铵结晶紫 番红 碘液 95%酒精 无菌水 香柏油 吸水纸 擦镜纸 培养基 斜面培养基 牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g 琼脂 15~20g，自来水 1000ml，pH 7.2~7.4 鉴定培养基 可溶性淀粉 20g, 硝酸钾 1g，磷酸氢二钾 0.5g, 氯化钠 0.5g, 硫酸镁 0.5g，硫酸亚铁 0.01g，琼脂 20 g, 自来水 1000ml，校正pH 至 7.2～7.4, 摇瓶培养基 玉米粉 2g，黄豆饼粉 1.5g，氯化钙 0.02g，硫酸镁 0.02g，氯化钠 0.25g，磷酸氢二钾 0.2g，磷酸氢二钠 0.2g，柠檬酸钠 0.2g，硫酸铵 0.075g,(溶解后加)，校正 pH 值 7.0 3.实验方法 仪器的准备 ①准备试管若干支，洗净晾干，其中 7 支各装 9 毫升蒸馏水（或自来水），上塞， 10 支一捆 121 度高压灭菌 20-30 分钟。 ②培养皿若干个并洗净晾干，每 5 个一包，高压灭菌。 ③移液管洗净塞上脱脂棉，用报纸条包好、捆扎高压灭菌。 ④准