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仪器分析 梯度洗脱技术 李锋 讲师 知识点 主要内容 梯度的定义 梯度系统 — “高压混合”HPLC系统 — “低压混合”HPLC系统 梯度延迟或死体积 流动相的选择 最佳的色谱条件 梯度洗脱常见的问题 梯度洗脱技术 梯度的定义 流动相的组成或流速随洗脱时间的变化而变化 — 起始为弱洗脱能力的溶剂，随着时间的推移逐步变为洗脱能力较强的溶剂 — 惯例 o A通常是洗脱能力较弱的溶剂或者流动相 o B通常是洗脱能力较强的溶剂或者流动相 梯度洗脱技术 为什么要进行梯度洗脱？ -样品在色谱柱上有宽范围的保留 -能够增加峰容量，更好的对复杂包含多种物质的组分进行 强有力的分离 -使峰形变窄 -单位时间内的分离能力增加，有效的缩短分析时间 梯度洗脱技术 梯度洗脱系统的类型 “高压”系统 — 溶剂混合处在泵的高压一侧，即混合点处于泵头之后 “低压”系统 — 溶剂混合处在泵的低压一侧，即混合点处于泵头之前 梯度洗脱技术 “高压”梯度系统 优点 — 系统体积小 — 没有严格的在线脱气机要求 缺点 — 一个泵只能控制一路溶剂 — 最多仅允许三路溶剂（通常二路） 梯度洗脱技术 “低压”梯度系统 优点 — 只需一个泵头 — 同时使用多种溶剂 （通常不超过四种） 缺点 — 较大的系统体积 — 需要在线脱气 梯度洗脱技术 梯度滞后体积与死体积 新系统 1ml (Waters