凯式定氮装置.docx

仪器使用-凯氏定氮装置 凯氏定氮仪由蒸汽发生器、反应室、冷凝管三部分组成（见下图）。 凯氏定氮蒸馏装置示意图 1.电炉 2.蒸气发生器 3.安全管 4.橡皮管 5.碱液室 6.反应室 7.加样口 8..安全管 9.冷凝管 10.接受瓶 11.棒状玻塞 12.夹子 仪器原理：含氮有机物与浓硫酸共热，有机物中所含氮转变成氨，并与硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，用氢氧化钠碱化后，释出氨，随水蒸馏出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用标准酸液或标准碱液滴定，用空白试验校正。 使用方法： 定氮仪的构造和安装 蒸汽发生器包括一个电炉(1)及一个 3～5 升容积的烧瓶(2).蒸汽发生器借橡皮管(4)与反应室相连。反应室上边有二个小烧杯，一个叫加样口(7) 上面有棒状玻塞(11)供加样用；一个叫碱液室(5) 盛放液。样品和碱液由此可直接到反应室 (6)中。反 应室中心有一长玻璃管，其上端通到反应室外层，下端靠近反应室的底部。反应室外壳下端底部有一开口，连有橡皮管和管夹 (12)，由此放出反应废液。反应所产生的氨可通过反应室上端气液分离器 (8)经冷凝管 (9)通入收集瓶 (10)中。反应室与冷凝管之间由橡皮管相连。 样品的处理 固体样品 随机取一定量研磨细的样品放入恒重的称量瓶中，置于 105℃的烘箱中干燥 4h 用坩锅钳将称量瓶取出放入干燥器内，待降至室温后称重，随后继续干燥样品，每干燥 1h，称重一次，恒重即可。 血清样品 取人血（或猪血）放入离心管中，于冰箱中放置过夜。次日离心除去血凝块，上层透明清液，即为血清。吸出 1ml 血清加到 50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀备用。 消化 取 3 支消化管并编号，在 1、2 号管中各加入精确称取的干燥样品 0.5～1g，加催化剂 6.4g，浓硫酸 10ml 和 2 粒玻珠，在 3 号管中各加相同量的催化剂和硫酸（若样品是液体时，还要加与样品等体积的蒸馏水）作为对照， 用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质。摇匀后，将瓶口上放一小漏斗，再把烧瓶斜置铁筐内放在通风厨内的电炉上消化。通常消化需要 1～3h（对于那些赖氨酸含量较高的样品需要更长的间）。直到消化液由淡黄色变成清晰的淡蓝绿色，消化即告成功。为了保证消化彻底，再继续加 0.5h。消化完毕，取出消化管冷却至室温。加入 20ml 蒸馏水，无损的转入 100ml 溶量瓶中，用蒸溜水定容至刻度，混匀，作为试样分解液。 蒸馏 取 3 个 100ml 锥形瓶，分别加入 2％硼酸 20ml，混合指示剂 2 滴，溶液呈紫红色，用表面皿覆盖备用。 洗涤、加样：先煮沸蒸汽发生器，器中盛有 2／3 体积的用几滴硫酸酸化过的蒸馏水，样品杯中也加入 2 ／3 体积蒸馏水进行水封。关闭夹子 (12)使蒸汽通过反应室中的插管进入反应室，再由冷凝管下端逸出。在冷凝管下端放一空烧杯以承受凝集水滴。这样用蒸汽洗涤 5min 左右，在冷凝管下口放一个准备好的盛有硼酸- 指示剂的锥形瓶，位置倾斜，冷凝管下口应完全浸泡于液体内，继续用蒸汽洗涤1～2min，观察锥形瓶中的溶液是否基本上不变色，若不变色，则证明蒸馏器内部已洗涤干净。下移锥形瓶，使硼酸液面离开冷凝管口约1cm，继续通蒸汽 1min。 加样前先撤火，务必打开夹子 (12) (这是本实验的关键，否则样品会倒抽到反应室外，准确移取试样分解液 10ml，打开样品杯的棒状玻塞，将样品放入反应室，用少量蒸溜水冲洗样品杯后也使之流入反应室，将夹子(12)夹紧。盖上玻塞，并在样品杯中加蒸馏水进行水封。将装有硼酸-指示剂的锥形瓶放在冷凝管口下方， 打开存放碱液杯下端的夹子，放 10ml 40％氢氧化钠溶液于反应室后，立即上提锥形瓶，使冷凝管下口浸没在锥形瓶的液面下，目的是保证放出的氨全部被硼酸吸收。 滴定 全部蒸馏完毕后，用 0.0100mol／L 标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，直至硼酸-指示剂混合液由绿色变回淡紫色，即为滴定终点。 计算 粗 蛋 白 质 = (V２－V1)×c×0.0140×6.25m×V′/V×100% 式 中 ： V2——滴定试样时所需标准酸溶液体积(ml)。 V1——滴定空白时所需标准酸溶液体积(ml)。c——盐酸标准溶液浓度(mol/L)。 m——试样质量(g)。 V——试样分解液总体积(ml)。 V′——试样分解液蒸馏用体积(ml)。 0.0140-与 1.00ml 盐酸标准溶液［c HCl)=1.0000mol/L］相当的、以克表示的氮的质量。 6.25——氮换算成蛋白质的平均系数