无菌接种和培养技术.pptxVIP

生物技术及应用专业教学资源库第四节无菌接种和培养技术 “杂菌污染” 神经元小王子的玫瑰极简主义 人类对微生物的应用研究在大多数情况下是利用微生物的纯培养物。 在自然界中，微生物一般是群居的，因此需要我们把所需要的微生物从混杂的群体中将其分离出来。 我们把只有一种微生物的培养物称为纯培养物。 我们把某种微生物从混合状态分离出来获得只有这种微生物的群体，这一过程称为微生物的纯培养。 微生物的分离与纯培养 菌落（Colony）：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。分离培养方法稀释倒平板法涂布平板法平板划线法稀释摇管法单孢子分离法 稀释倒平板法：取不同材料的稀释液少许，与已熔化并冷却到50℃的培养基混合，摇匀后倒入无菌的培养皿中，待培养数日，即可出现菌落。若稀释得当，可获得含有单个菌落的琼脂平板。 涂布平板法：将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在无菌平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。 平板划线法：在无菌条件下，用接种环沾取少许带分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、分区划线或者其他形式的连续划线，如果划线适宜的话，微生物细胞数量将随着划线逐渐分散开，培养数日后，可在平板表面得到单菌落。 用固体培养基分离严格厌氧菌有它特殊的地方。 如果该微生物暴露于空气中不立即死亡，可以采用通常的方法制备平板，然后置放在封闭的容器中培养，容器中的氧气可采用化学、物理或生物的方法清除。 对氧气更为敏感的厌氧性微生物？？？ 稀释摇管法：用无菌的琼脂培养基对材料进行梯度稀释，冷却后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。 形成菌落后，用无菌针取出封盖，以毛细管插入琼脂和管壁间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，随后置于培养皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。 单孢子（细胞）分离法：此法是用显微分离法从混杂的群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。 单细胞分离法的难度与细胞或个体的大小成反比，较大的微生物如藻类、原生动物较容易，个体很小的细菌则较难。 对于较大的微生物，可采用毛细管提取单个个体，并在大量的灭菌培养基中转移清洗几次，除去较小微生物的污染。 对于个体相对较小的微生物，需采用显微操作仪，在显微镜下进行。 分离纯培养方法比较分离方法优点缺点用途稀释倒平板法在培养基表面和内部均可生长，易获得单菌落热敏感菌易被烫死，菌落分布不均匀，严格好氧菌生长受限适用于分离兼性厌氧菌涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少，涂布不均匀，平板干燥效果差、容易蔓延适用于不耐热和好氧菌的分离平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数用于菌种的分离纯化稀释摇管法可有效隔绝空气操作复杂，取样困难，易污染常用于分离对氧敏感的厌氧性菌单孢子分离法快速分离出混杂群体中的目标微生物操作复杂，细胞越小越难分离高度专业化的科学研究 神经元 嗜碱细菌在30℃的环境下培养2天，再用环氧树脂胶封印。大 肠 杆 菌 利用选择培养基分离法 不同的细菌需要不同的营养物。 例如，不同细菌生长需要不同的pH、氧分压、碳氮源等 各种细菌对于化学试剂如消毒剂、染料、抗菌素以及其他物质等具不同抵抗能力。 将待分离的样品先进行适当处理以排除不希望分离到的微生物。 例如，分离得到芽孢细菌，可在倒平皿前将样品在高温处理一段时间，以破坏所有的或大部分的非芽孢细菌，这样分离得到的菌落将是芽孢形成菌。 在土壤中筛选蛋白酶产生菌，可以利用高温、抗生素等分离一些特定的微生物。 可在培养基中加牛奶或酪素，微生物生长时若产生蛋白酶，则会水解牛奶或酪素产生蛋白质水解圈，这样可将大量非产蛋白酶的微生物淘汰。 富集培养 利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，更容易分离出特定的微生物。 富集的条件可根据所需分离的微生物的特点从物理、化学、生物及综合因素等多个方面进行选择。 如温度、pH值、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。 如何从土壤中分离到能降解对羟基苯甲酸的微生物？配制只含对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基接种少量土样、培养取少量培养物转接到另一新鲜的培养基、培养重复多次，使该种微生物得到富集