无菌检查的学习课件.pptxVIP

无菌检查的学习课件;无菌检查法;一·基本定义;二·环境要求;三·仪器及用具;四·培养基;真菌培养基 改为 改良马丁培养基 选择性培养基 增加1种 ?-内酰胺酶培养基（用于?-内酰胺类供试品）即在硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基在接入供试品前分别加入?-内酰胺酶，?-内酰胺酶的用量应通过验证试验验证。其他中和剂或分散剂的量亦应通过验证。;;培养基的灵敏度检查 硫乙12ml，9支，4株菌，各1ml，每种培养基各接种2支（原3支），另1支培养基空白对照。培养3d(原5天)。 改良马丁9ml，5支，2株菌，各1ml，每种培养基各接种2支（原3支），另1支培养基空白对照。培养5d。 结果判定 空白管培养基无菌生长，加菌的培养基管均生长良好，判灵敏度检查合格。 （原3支管有2管生长，合格。） ;五·菌种及菌液制备;;稀释液、冲洗液及其制备法 ①0.1%蛋白胨水溶液 蛋白胨 1g, 加水1000ml, 加热使溶，过滤，调pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。冲洗液用。 ②pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 KH2PO4 3.56g，Na2HPO4 7.23g，NaCl4.3g, 蛋白胨 1g, 加水1000ml, 加热使溶，过滤，分装，灭菌。 ③聚山梨酯80-0.1%蛋白胨水溶液 蛋白胨1g, 聚山梨酯10ml，水1000ml, 加热使溶，过滤，调pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。用于水溶性供试品的无菌检查。 ④聚山梨酯80氯化钠-蛋白胨缓冲液 聚山梨酯80 10ml,KH2PO4 3.56g，Na2HPO4 7.23g，氯化钠4.3g，蛋白胨1g，水1000ml，加热使溶，过滤，分装，灭菌。用于水溶性供试品的无菌检查 ;六·方法验证试验;增订： 方法验证试验 当供试品为新的产品或供试品的检验条件发生改变时，应进行方法验证试验，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计。验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。;薄膜过滤法 将规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100 cfu的试验菌。取出滤膜接种至相应的培养基中，或将培养基加至滤筒内。取一支装有同体积培养基的容器，加入等量的试验菌，作为阳性对照，按规定温度培养3～5天。各试验菌同法操作。; ???接接种法 取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8支，分别接入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌的菌悬液1ml(含菌小于100 cfu)各两管；取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液1ml(含菌小于100 cfu)各两管。其中1管接入规定量的供试品，另1管作为阳性对照，按规定的温度培养3～5天。 ; 与阳性对照比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用，可按此法进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，则供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量；增加培养基的用量；使用中和剂如?-内酰胺酶、对氨基苯甲酸、聚山梨脂80等；更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行验证试验。 验证试验可与供试品的无菌检查同时进行。 ;供试品抽验量和检验量 检验数量 指一次试验所用的供试品最小包装容器的数量。 检验量 指一次试验所用的供试品总量（g或ml）。每份培养基接种的供试品量。 抽验量 生产厂和药检所的检验数量和检验量与2000版的规定基本一致，见表1、表2、表3。其中表3是增订 固体制剂的最小检验量。个别做了修订。 ; 表1 批产品出厂最少检验数量 ;抗生素固体原料药（≥5克） ;; 表3 上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量 ;注：1.每种培养基各接种10支供试品。 2.抗生素粉针剂（≥5克）及抗生素原料药（≥5克）的最少检验数量为6瓶（或支），桶装固体原料的最少检验数量为4个包装。 3.如果医用器械体积过大，培养基用量可在2000ml以上，将其完全浸没。 ;修订 ①大容量（50-100ml注射剂），取半量检查。 ②表1，2，3中最少检验量不包括阳性对照试验的用量。 薄膜过滤法 增加1/2的最小检验数量作阳性对照用； 直接接种法 增加供试品1支作阳性对照。 ③采用直接接种法，若每支（瓶）供试品的装量按规