贝类 脂溶性海洋生物毒素的检测 液相色谱-串联质谱法.pdfVIP

XX/T XXXXX—XXXX 贝类 脂溶性海洋生物毒素的检测 液相色谱-串联质谱法 警示—为避免毒素的危害，应戴手套进行操作。移液管及移液器吸头等用过的器材、废弃的提取液等应 在次氯酸钠溶液（5%）浸泡 1h 以上以使毒素分解。 1 范围 本标准规定了贝类脂溶性海洋生物毒素大田软海绵酸、鳍藻毒素、蛤毒素、虾夷扇贝毒素、原多甲 藻酸毒素、环亚胺毒素等 11 个毒素化合物的液相色谱-串联质谱检测方法原理、操作步骤及结果计算等。 本标准适用于贝类体中脂溶性海洋生物毒素的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 贝类样品经甲醇提取，碱性条件下水解释放酯化态生物毒素部分，用HLB固相萃取柱净化，液相色 谱分离，串联质谱测定，外标曲线法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，以下所用试剂均为分析纯试剂，水为符合GB/T 6682规定的一级水。 4.1 乙腈 （CH CN）：色谱纯。 3 4.2 甲醇 （CH OH）：色谱纯。 3 4.3 甲酸 （HCOOH）。 4.4 甲酸铵 （HCOONH ）。 4 4.5 氨水 （NH •H O）：浓度≥25%。 3 2 4.6 氢氧化钠（NaOH）。 4.7 盐酸 （HCL）：浓度≥36%。 4.8 氢氧化钠溶液 (2.5 mol/L)：准确称取 50 g 氢氧化钠，用水定容至 500 mL，室温保存。 4.9 盐酸溶液 (2.5 mol/L)：准确量取 104.5 mL 盐酸，用水定容至 500 mL，室温保存。 4.10 甲醇溶液(30%)：量取 30 mL 甲醇加到70 mL 水中，混合均匀，室温，现用现配。 1 XX/T XXXXX—XXXX 4.11 甲醇溶液(20%)：量取 20 mL 甲醇加到80 mL 水中，混合均匀，室温，现用现配。 4.12 氨水甲醇溶液 (0.3%)：吸取 0.3 mL 氨水，用甲醇定容至 100 mL，室温，现用现配。 4.13 脂溶性海洋生物毒素标准 （附录A）溶液：OA、DTX1、DTX2、PTX2、YTX、homo-YTX、AZA1、AZA2、 AZA3、GYM、SPX1 标准物质含量≥97%，避光保存于-20 ℃。 4.14 脂溶性海洋生物毒素标准储备液：分别吸取适量的各脂溶性海洋生物毒素标准溶液（见 4.13）， 甲醇 （见 4.2）配制储备溶液。0.22 μm 滤膜（见 5.12）过滤，-20 ℃避光保存备用。各脂溶性海洋 生物毒素标准储备液浓度分别为：OA 40 ng/mL, DTX1 40 ng/mL, DTX2 40 ng/mL, YTX 400 ng/mL, Homo-YTX 400 ng/mL, PTX2 1000 ng/mL, SPX1 200 ng/mL, GYM 10 ng/mL, AZA1 200 ng/mL, AZA2 100 ng/mL, AZA3 100 ng/mL。 4.15 脂溶性海洋生物毒素混合标准工作溶液：分别吸取适量的各脂溶海洋生物毒素标准储备溶液（见 4.13），甲醇 （见 4.2）配制正离子混合标准工作溶液 （PTX2、AZA1、AZA2、AZA3、GYM、SPX1)）和负 离子混合标准工作溶液（ （OA、DTX1、DTX2、YTX、homo-YTX）。0.22 μm 滤膜（5.12）过滤，-20 ℃ 避光保存备用。各脂溶性海洋生物毒素的浓度见表 1。 表1 脂溶性海洋生物毒素标准工作溶液（浓度单位：ng/mL） 组别