生物化学技术补充吸收光谱分析法.pptxVIP

生物化学技术补充吸收光谱分析法;概念及分类; 一、吸收光谱分析法 ; (一)可见-紫外分光光度法 ;;3.排除干扰的方法;第7页/共24页; 在测得波长λ1和λ2处测得混合物的吸光度分别是A1a+b和A2a+b，则ΔAa+b=A1a+b - A2a+b = A1a + A1b–A2a–A2b =ΔAa +ΔAb 因组分a在λ1和λ2处的吸光系数相等，即 欲测组分b在两波长处的吸光系数相差愈大，则灵敏度愈高。用双波长法还能消除样品溶液背景吸收的干扰和混浊的干扰，提高测定的准确性。近年来由于新的、灵敏度高、选择性好的显色剂和掩蔽剂不断出现，一般不经分离过程即可直接比色测定；还可采用联立方程法、等吸收点法等解决定量中的干扰问题; 3.分光光度计的光源检查和波长校正 ;常用的方法有 ①用含某些特定元素的玻璃来较正 最常用的有镨钕玻璃、钬玻璃等。校正时将这种玻璃放在比色皿座上，以空气调0，测定几个吸收峰值的波长是否相符。如最常用的测定镨钕滤光片在585nm的杂光水平应在5%以内 ②可利用某些标准溶液进行校正 如标准重铬酸钾溶液(在1000ml的0.05mol／L的KOH溶液中溶解0.0400g纯重铬酸钾．(K2CrO4))，在25℃以1cm比色皿在各波长测定其标准吸光度，如表2~1。重铬酸钾溶液的优点是在紫外区270nm及370nm处有两个最大吸