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微生物实验二;内 容 提 要;（一）内毒素的检测 ;;;;;;;;二. 肠道致病菌的分离培养;;;二、分类;双糖铁培养基;培养基的制备程序;肉汤培养基制作方法;4.测定酸碱度并调至pH7.6，必要时用滤纸过滤。 5.按需要分装于试管或烧瓶内，加棉塞，置高压蒸汽灭菌器内，经121.3℃、20-30分钟灭菌。 6.灭菌后置37℃温箱孵育24小时，无杂菌生长，即可应用或放冰箱备用。 ;液体培养基加入1-2%的琼脂为固体培养基，加入0.5%琼脂为半固体培养基。固体培养基加入血液即为血平板（营养培养基）。 ;血液琼脂培养基（血平板）;含有胆酸盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长. 含有中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红. 常用于培养肠道致病菌.;SS培养基;;1 大肠杆菌: 生物学性状: G- 镜下为杆状， 多数菌株有周鞭毛，菌毛，无芽孢，兼性厌氧 营养要求不高,可在普通琼脂培养基上生长，发酵葡萄糖等,产酸产气 最适宜温度为37度,最适宜pH为7.4;菌落特点： 圆形，凸起，灰白色，表面光滑，湿润，直径2-3mm;肠产毒型大肠杆菌（轻度腹泻，肠毒素， 定植因子） 肠侵袭型大肠杆菌（与志贺菌相关，与菌痢相似 里急后重， 不产生肠毒素） 肠致病型大肠杆菌（最早发现的引起腹泻的 大肠杆菌，婴幼儿） 肠出血型大肠杆菌（出血性结肠炎和溶血性 尿毒综合征的病原体， 轻 度水泻伴剧烈腹痛血便， 常见食品污染） 肠集聚型大肠杆菌（婴儿和旅行者持续水样腹泻 偶有血便，不侵袭细胞， 在细胞表面自动聚集，形成 砖样排列）;（2）伤寒杆菌;菌落特点: 圆形,凸起,无色，细小，半透明,表面光滑,湿润,直径2-3mm.;1、相似的形态染色—从形态上无法区别 ;2、活泼的生化反应;肠道杆菌的生物学性状; 将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基。 (每个实验室8个平板） (接种好后，做好标记，用胶布按班绑好) 放入37???温箱中培养24小时。取出放4℃冰 箱中保存备用。;; 空气中细菌的检查（每个班1个平皿） 原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。 方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37 ℃ 培养24小时，观察结果。;1.2.1紫外线对细菌的影响（每个实验室1个培养皿） 原理：紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上的两个相邻胸腺嘧啶以共价键结合成二聚体，从而干扰DNA的复制与转录导致细菌变异或死亡。对病毒也有破坏作用。 紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。普通玻璃、纸张、水蒸气、尘埃等均能阻挡。 紫外线中波长为240-300nm者具有杀菌能力，其中265-266nm的杀菌作用最强。 常用于消毒物体表面，手术室无菌实验室，传染病房的空气消毒及不耐热物品消毒。;紫外线对细菌的影响; 1 促进菌体蛋白质变性或凝固。 2 干扰细菌酶系统和代谢。 3 损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成，物理 结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒至灭菌作用。 ; 有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物， 称为化学消毒剂； 浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂； （只能外用，对细菌的敏感性不同） ;化学消毒剂分类;影响消毒灭菌的因素;化学消毒剂对细菌的影响; 方法：用“打咳法”进行检查。 取一个血琼脂平皿培养基（咽喉部多为葡萄球菌），打开平皿盖，对着平皿咳嗽几次（口腔前约10厘米），然后放入37℃温箱培养24小时后观察菌落数量及特征。 ;;高压蒸气灭菌器;高压蒸汽灭菌法;全自动高压蒸汽灭菌锅 ;Systec D-200 2D 双门高压灭菌器;台式蒸汽灭菌器 B