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共轭焦显微镜简介第1页/共61页第2页/共61页共轭焦显微镜共焦显微术的形成与发展※共焦显微术的原理※共焦显微镜的分类共焦显微镜的关键技术激光扫描共焦显微镜技术共焦显微镜的应用第3页/共61页 共轭焦显微镜共轭焦显微技术形成：/wiki/1953%E5%B9%B41953/wiki/1953%E5%B9%B4年?/wiki/%E7%BE%8E%E5%9C%8B美国学者/wiki/%E9%A9%AC%E6%96%87%C2%B7%E6%98%8E%E6%96%AF%E5%9F%BA马文/wiki/%E9%A9%AC%E6%96%87%C2%B7%E6%98%8E%E6%96%AF%E5%9F%BA·/wiki/%E9%A9%AC%E6%96%87%C2%B7%E6%98%8E%E6%96%AF%E5%9F%BA明斯基提出。发展：随后，P.Davidovits, A.f.Slomba和C.J.R.Sheppard等多位学者对共焦成像进行了更细致的研究 ，越来越多的基于共焦原理的显微术被开发出来 。 直到70年代才有真正实用的共焦显微镜问世 。 80年代中期才有商品机型出售。 九十年代以来随着计算机图像处理技术的发展，共焦显微术三维层析能力的优点也逐渐凸现出来，受到越来越多研究人员的重视。 近几年对共焦显微术的研究已形成了一个世界性的热潮 ，人们已经研制出了多种多样的共焦显微镜。第4页/共61页共焦显微术原理共焦：从一个点光源发射的探测光通过透镜聚焦到被观测物体上，如果物体恰在焦点上，那么反射光通过原透镜应当汇聚回到光源，这就是所谓的共聚焦，简称共焦。 第5页/共61页共焦显微术原理共焦显微镜在反射光的光路上加上了一块半反半透镜（dichroic mirror），将已经通过透镜的反射光折向其它方向，在其焦点上有一个带有针孔（Pinhole），小孔就位于焦点处，挡板后面是一个光电倍增管（photomultiplier tube，PMT）。 第6页/共61页样品发射光入射光滤光片激光器长通滤光片扩光器针孔检测器第7页/共61页 共轭焦显微镜共焦显微术原理共焦显微术的基本原理如图所示。共焦显微镜分为反射式与透射式两种形式。点光源发出的光经物镜后聚焦到物体的表面，再由物体反射或透射后经聚光镜再聚焦到探测器。 第8页/共61页共焦显微术原理共焦显微术的基本原理如图所示。共焦显微镜分为反射式与透射式两种形式。点光源发出的光经物镜后聚焦到物体的表面，再由物体反射或透射后经聚光镜再聚焦到探测器。 第9页/共61页共焦显微术原理优点：具有高分辨率尤其是纵向高分辨率的 特点 ，使得它可以对样品的轴向进行光学 层析，从而可以重构出样品的三维图像。 原因：探测器前面放置了小孔光阑，使得杂散光被大大消除，而且小孔位于聚光镜的焦点处，非物镜焦平面上的光线被挡住，这样探测器的信噪比就大大提高，成像有很高的对比度和清晰度。 第10页/共61页共轭焦显微镜的分类商业化的共聚焦（共轭焦显）显微镜（Confocal microscope）分三类：※/wiki/%E5%85%B1%E8%81%9A%E7%84%A6%E6%BF%80%E5%85%89%E6%8E%83%E6%8F%8F%E9%A1%AF%E5%BE%AE%E9%8F%A1共聚焦激光扫描显微镜（Confocal Laser Scanning Microscope，CLSM，LSCM）（点扫描激光共焦显微镜、线扫描激光共焦显微镜、光纤激光共焦显微镜）转盘共聚焦显微镜（Spinning-disk (Nipkow disk) confocal microscopes）可编程序阵列显微镜（Programmable Array Microscopes (PAM)）其他：荧光共焦显微镜、共焦干涉显微镜、全息共焦显微镜、非扫描激光共焦显微镜（需做说明） 第11页/共61页显微镜成像清晰度的决定因素: 1.分辨率2.球差3.色差第12页/共61页1、分辨率： 指显微镜能将近邻的两个质点分辨清楚的能力,通常是用显微镜所能分辨清楚最近的相邻两点间的距离来表示。第13页/共61页人眼及各类显微镜的分辨率人眼分辨率：0.20 mm光学显微镜分辨率：0.25 mm共焦显微镜分辨率：0.18 mm电子显微镜分辨率：0.20 nm第14页/共61页2、球差： 是由于透镜不能把近轴光线和远轴光线在光轴上共聚焦，以至透过标本一点的光线，在通过透镜时不能聚焦成一点,而是形成一个光斑,从而使成像模糊不清。第15页/共61页3、色差： 是由于显微镜透镜类似于三棱镜,对不同颜色的光线具有不同的折射率。所以光线透过透镜后,不同色的光聚焦在不同点上,从而使成像模糊,而且像的边缘尚带有色晕。第16页/共61页共焦显微镜的几个