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实验五福医大计数第1页/共18页第2页/共18页 实验五 血小板计数（临检指导P48）目的 掌握普通光学显微镜直接血小板计数法。第3页/共18页 1.概述 血小板是由骨髓中成熟巨核细胞的胞质分割而生成。其生成受血小板生成素（TPO）的调节。 正常静息状态下，血小板为双面微凸的圆盘形，直径2～4μm、平均体积7.2fl的非细胞结构成分。 第4页/共18页染色后镜下可见血小板的胞质呈淡蓝色，内含 较多的紫红色嗜天青颗粒。血涂片上，为红细胞数的1/30~1/20，通常每个 油镜视野可见7~35个，分散或3~5成群分布。第5页/共18页2.光学显微镜直接计数法（1）原理 血液(20μl)经稀释液(0.38ml)按一定比例稀释和破坏红细胞后，充入血细胞计数池内，在显微镜下计数一定范围内的血小板数，经换算求出每升血液中的血小板数量。 第6页/共18页 由于血小板易黏附、聚集以致破坏，优质的血小板稀释液应具备的条件是： （1）有效地阻止凝血。（2）很快地固定血小板，防止血小板聚集和变形。（3）溶血稀释液要求红细胞破坏完全。（4）组成简单、容易保存、不长细菌。 第7页/共18页根据所采用的稀释液不同而又分为破坏红细胞稀释法（溶血法）： 草酸铵溶血法： 对红细胞破坏力强，血小板形态清楚。 为首选常规计数方法。 复方尿素溶血法：尿素可溶解红细胞、甲醛可固定血小 板和防腐，稀释后血小板胀大易辨认， 尿素容易分解，试剂容易失效。尿素 不能完全破坏红细胞。 高铁氰化钾溶血法：试剂稳定易于长期保存但不能完全 破坏红细胞。第8页/共18页 不破坏红细胞稀释法：复方碘稀释液。红细胞未破坏及试剂易细菌生长，干扰计数，已被淘汰 。第9页/共18页实验五 血小板计数（2）操作步骤 1）吸取稀释液：准确吸取10g/L草酸铵溶血剂0.38ml于小 试管内。 2）采血：准确采血20μl加入上述试管，立即充分混匀。 3）静置：待完全溶血后再混匀1min。 4）充池：混匀血小板悬液，并取1滴充入血细胞计数池， 静置10min。 5）计数：用高倍镜计数中央大方格内的中央及四角共5个 中方格内的 血小板数量。第10页/共18页实验五 血小板计数（3）计算 血小板数/L=N×5×10×20×106=N×109/L 参考值： （100~300）×109/L第11页/共18页实验五 血小板计数（4）注意事项 1）稀释液必须符合优质的血小板稀释液，因此稀释 液必须新鲜、洁净，无杂物和细菌污染；定期检 查稀释液的质量，实验前应先做稀释液空白计 数，符合仪器使用说明方可使用。第12页/共18页2）器材及操作必须标准化和规范化 ①所用器材必须校准、洁净、干燥。②采血、充液、计数均应规范，避免血小板激活或破坏。③血小板悬液充入计数池后必须静置15min再计数，并在采 血后1h内完成计数。时间过短或过长则可导致血小板未完 全下沉或失去光泽，使计数结果偏低。第13页/共18页④充液前必须轻轻摇动血小板悬液2min或200次以上，但用力不宜过大，以免造成血小板破坏或产生气泡，引起计数误差。⑤镜下观察时的光线要适中，并注意与细胞碎片、灰尘、微生物等鉴别。 第14页/共18页3）及时核准血小板计数结果 由经验丰富的检验人员进行。 常用的方法有： ①用同1份血标本制备良好的血涂片，观察血小板数量、形 态和分布情况，进行核对。 ②用血小板计数的参考方法核对计数结果。 ③每份标本最好做2次计数，若2次计数误差小于10%，取 其均值报告；若计数误差大于10%，应做第3次计数，取 2次相近结果的均值报告。第15页/共18页4）排除非技术因素的影响 某些病理情况可干扰计数，出现血小板假性减少或增多。①血小板聚集或凝集、异常蛋白血症、巨大血小板、卫 星现象、高脂血症导致血小板假性减少。②HbH包涵体病人的红细胞碎片、慢性淋巴细胞性白血 病病人的淋巴细胞核和细胞质碎片、小红细胞等可被 误认为血小板，导致血小板假性增多。第16页/共18页5）标本采集 最好清晨采血，采集过程中应避免反复握拳、拍打采血部位、扎止血带的时间过长（＜1min），以免血小板激活而影响计数结果。 采血后立即进行血小板检测。第17页/共18页（5）方法学评价 1）普通光学显微镜直接计数法： 以草酸铵溶稀释液法为常规方法和参考方法。 2）相差显微镜直接计数法： 此法计数的准确性高，血小板易于识别，并可于照相 后核对计数结果，是计数血小板的参考方法。但由于 所用仪器昂贵，临床上较少选用。 第18页/共18页感谢您的欣赏