DB 5304T 060-2023 主要动物疫病免疫抗体监测技术规范.docxVIP

ICS11.220CCS ICS 11.220 CCS B 41 玉 溪 市 地 方 标 准 DB 5304/T 060—2023 主要动物疫病免疫抗体监测技术规范 2023 - 04 - 20 发布 2023 - 07 - 19 实施 玉溪市市场监督管理局 发 布 DB 5304/T 060 DB 5304/T 060—2023 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由玉溪市动物疫病预防控制中心提出。本文件由玉溪市农业农村局归口。 本文件的附录A、B、C、D、E为资料性附录。 本文件起草单位：玉溪市动物疫病预防控制中心 本文件主要起草人：吕嵘、杨耀兰、罗晓燕、杨秋楠、宋诗雅、李晶、张晓舟、徐聪、荚洪涛、吴明伟、杨曦。 I 主要动物疫病免疫抗体监测技术规范 范围 本文件规定了动物疫病免疫抗体监测的主要监测病种、血清样品采集、采样单填写、血清分离与保存、样品的送检与接收、抗体监测方法及结果判定、监测结果记录与汇总、血清留样、无害化处理等。 本文件适用于玉溪市主要动物疫病免疫抗体监测。 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18090 猪繁殖与呼吸综合征诊断方法 GB/T 18935 口蹄疫诊断技术 GB/T 27982 小反刍兽疫诊断技术 GB/T 35906 猪瘟抗体间接ELISA检测方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 动物疫病 主要是指生物性病原引起的动物群发性疾病，包括动物传染病、寄生虫病。 3.2 抗体 在病原刺激下产生的一类能与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白，抗体主要存在于体液中。 3.3 免疫监测 普检或抽检动物群体的抗体水平，以监控群体的免疫状态，为实施计划免疫和增强免疫提供依据。 3.4 血清 血浆去除纤维蛋白原后的(胶体性)液体。 主要监测病种 1 在玉溪市范围内开展的主要动物疫病监测病种。 ——国家强制免疫病种：高致病性禽流感、口蹄疫、小反刍兽疫。 ——地方计划免疫病种：新城疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征。 血清样品采集 采血器材 防护服、防护口罩、无粉乳胶手套、注射器、针头、普通真空采血管、2ml离心管、碘酊、75%酒精棉球、冰袋、冷藏容器、采样登记表、记号笔、签字笔等。 采血时间 猪免疫注射28天后（口蹄疫免疫35天后），其他动物免疫21天后方可采血。 采血方法 对采血部位的皮肤先剃（拔）毛，碘酊消毒，75%的酒精脱碘。生猪采用站立式或仰卧式前腔静脉采血、牛羊站立式颈静脉或尾静脉采血、禽类翅静脉采血。 采样单填写 采血时应按《血清样品采样登记表》（参见附录A）的内容详细填写采样单，采样单一式两份，一份由被采样单位保存，一份由采样单位保存。 血清的分离与保存 血清分离 采集的血液样品可室温放置析出血清，或经4000r/min、3-5分钟离心，吸出上层血清，放置于合适的离心管中。 血清编号 血清编号为“行政区域拼音大写字母”加上“不同动物种类血清编号英文字母和阿拉伯数字组合” 用防水记号笔清晰标记于离心管。 ——猪以“A01、A02、A03??An”模式编写； ——牛以“B01、B02、B03??Bn”模式编写; ——羊以“C01、C02、C03??Cn”模式编写； ——禽以“D01、D02、D03??Dn”模式编写。 例如：红塔区猪血清编号为：HT A01;通海县禽血清编号为：TH D01。 血清的保存 血清立即检测放置4℃保存；如果保存时间较长，应放置在-20℃冰箱内保存。 样品的送检与接收 2 运输血清样品时将血清放在盛有冰块的冷藏箱中运送。样品送检前送检单位填写《实验室样品送样表》（参见附录表B.1）；样品送达兽医实验室，实验室人员进行接收样品登记，填写《实验室接样登记表》（参见附录表B.2）。 抗体监测方法及结果判定 高致病性禽流感 免疫抗体监测方法： 血凝和血凝抑制试验（HA-HI） 1 鸡红细胞制备 分别至少采集三只无特定病原体（SPF）健康公鸡或未免疫（禽流感和新城疫）健康公鸡全血3~5ml，置于盛有30~40ml灭菌生理盐水离心管中，洗涤离心2次，每次均以2000r/min 离心 5min，洗涤后弃去上清，混合于一个离心管中，以2000r/min 离心 5min。吸取底层红细胞用灭菌生理盐水配置1%体积的红细胞悬液。 血凝试验（HA） 在 96 孔 V 型微量反应板中，每孔加 25μL 灭菌生理盐水。 在微量反应板第 1 孔加 25μL 标准阳性抗原，充分混匀。 依次从第 1 孔吸取 25μL 液体加入第 2 孔，混