农业农村部公告第423号-13-2021CN.docx

ICS 65.020.01 CCS B 04 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第423号一13—2021 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响 第9部分：家蚕 The detection of environmental safety of genetically modified plants— Effects of exogenous insecticidal protein on non-target organisms— Part 9:Bombyx mori 2021-05-07 发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I 农业农村部公告第423号—13—2021 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是《转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响》的第9部分。《转基因植物 环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响》拟分为如下部分： ——第1部分：日本通草蛉幼虫； ——第2部分：日本通草蛉成虫； ——第3部分：龟纹瓢虫幼虫； ——第4部分：龟纹瓢虫成虫； ——第9部分：家蚕。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：农业农村部科技发展中心、浙江省农业科学院。 本文件主要起草人：徐晓丽、张旭冬、周文林、梁晋刚、徐俊锋、杨蕾、来勇敏、陈笑芸、汪小福、彭城。 农业农村部公告第423号— 13—2021 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响 第9部分：家蚕 1 范围 本文件规定了转基因植物外源基因表达的杀虫蛋白对家蚕(Bombyx mori)影响的检测方法， 本文件适用于转基因植物外源基因表达的杀虫蛋白对家蚕潜在经口毒性的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 31270.11—2014 化学农药环境安全评价试验准则 第11部分：家蚕急性毒性试验 农业部1485号公告一17—2010 转基因生物及其产品食用安全检测 外源基因异源表达蛋白质等 同性分析导则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 外源杀虫蛋白 exogenous insecticidal protein 转入植物的外源抗虫基因所表达的杀虫蛋白。 3.2 经口毒性 oral toxicity 通过将受试杀虫蛋白均匀混入饲料，经口给予受试生物，对受试生物的生存和生长发育产生的有害 影响。 3.3 剂量 dose 受试杀虫蛋白的使用量。用每克人工饲料(鲜重)中混入受试杀虫蛋白的质量(μg)来表述。 3.4 死亡率 mortality 死亡的受试生物个体数占总受试生物个体数的比率(%)。 3.5 半数致死浓度 median lethal concentration,LCso 经口给予试虫受试杀虫蛋白后，通过统计分析获得的预期能够引起受试生物死亡率为50%的受试杀 虫蛋白浓度(基于第7d 家蚕死亡率进行计算)。 3.6 最大耐受浓度 maximum tolerated concentration, MTC 与阴性对照相比，受试杀虫蛋白不引起受试生物死亡率显著提高的最大试验用浓度。 4 原理 按一定剂量(浓度)把转基因植物外源杀虫蛋白均匀混入人工饲料，直接饲喂家蚕。以纯人工饲料(或 混入受试杀虫蛋白溶剂/介质的饲料)作为阴性对照，以混入已知对家蚕有毒的有机或无机胃毒性化合物 的人工饲料为阳性对照。试验7d 后观察记录测试家蚕的体重及死亡率。受试杀虫蛋白处理组与阴性对 工 2 农业农村部公告第423号—13—2021 照组家蚕死亡率差异达显著水平时，求得半数致死浓度(LCs), 检测外源杀虫蛋白对家蚕的潜在经口 毒性。 5 试剂和材料 5.1 溶剂 蒸馏水、磷酸盐缓冲液(PBS) 或其他适宜溶剂。 5.2 受试外源杀虫蛋白 受试外源杀虫蛋白可直接经转基因植物提取纯化获得，也可经微生物表达、提取和纯化获得，但应保 证所获得的杀虫蛋白与植物组织中表达的杀虫蛋白具有实质等同性，符合农业部1485号公告— 17—2010 的规定和要求。供试杀虫蛋白的纯度应不低于80%,并具有相应的生物活性。 5.3 阳性对照化合物 采用吡虫啉作为阳性对照，