动物繁殖学课件-配子与胚胎生物技术.pptVIP

冷冻长期保存牛、绵羊、山羊的胚胎经冷冻解冻后能够存活，且移植后均可受胎产仔。 在冷冻前需先依次经过含有由低浓度到高浓度防冻剂的杜氏培养液，防冻剂的最高梯度为1.0～1.5mol/L。每种浓度中停留5～10min，在最后一种浓度中降温冷冻。胚胎冷冻时必须采取缓慢降温。由室温降至-5℃～-7℃，每分钟降1℃，在此温度下进行诱发结冰，然后按每分钟降0.3℃～0.5℃的速度降至-33℃～-38℃，此后可直接浸入液氮保存。 解冻时不必控制升温速度，可直接放在室温条件下（20℃～25℃）或在35℃～37℃水浴中解冻。 解冻后必须再把防冻剂清除掉。方法是使胚胎按相反的方向（由高浓度向低浓度）依次通过含有不同浓度的防冻剂的培养液，最后移至不含防冻剂的培养液中进行移植。 牛胚胎冷冻较新的一种方法是在塑料细管中进行冷冻，一端装有胚胎和冷冻培养液，另一端为蔗糖液，解冻后随即被蔗糖液稀释，以冲淡防冻剂的含量，将塑料管直接装入移植器中，然后注入子宫。 （七）胚胎的移植 胚胎的移植也有手术法和非手术法两种方式，手术法一般用于所有的动物，主要用于小动物。而非手术法仅适用于牛、马及马鹿等大动物 1.手术法移植 在受体腹部作一切口，找到排卵一侧的卵巢并观察黄体发育情况，用注射器或移植管将胚胎注入到同侧子宫角上端或输卵管壶腹部内（以胚胎发育阶段而定）。只需吸取少量的冲洗液连同胚胎一块注入。 2.非手术移植法 牛的非手术移植，主要方式是将一只手伸入直肠，先检查黄体位于哪一侧和发育情况，然后握住子宫颈（如同人工授精操作一样），另一只手将移植管（注射器连接以导管或特制金属移植器）插入与黄体同侧的子宫角内，注入胚胎。 （八）供体和受体的术后观察 对术后的供体和受体不但要求注意它们的健康情况，同时要留心观察它们在预定的时间是否发情。 供体在下次发情时即可照常配种，或经过二、三个月再重复作为供体，收集胚胎。受体母畜术后如发情则说明未受胎，移植失败。 第二节 体外受精 哺乳动物精子和卵子的受精在自然情况下都是在动物生殖道内完成的，将这个生理过程在体外实验室的培养皿内进行，则称为体外受精（in vitro fertilization，IVF ）。 一、 发展简史 1951年，美籍华人张明觉和澳大利亚学者Austin分别发现了精子获能（cap acitation）现象，使动物体外受精研究进入了新纪元。 1959年张明觉在世界上首先获得了体外受精的的哺乳动物—试管兔，推动了体外受精研究工作的开展。 1978年首例人类试管婴儿路易斯·布朗（Louise Brown）诞生。 直到20世纪80年代，家畜的体外受精技术才取得突破，尤其是牛的体外受精技术发展迅速。 1981年Brackett等用体内成熟卵母细胞获得试管牛犊，随后Hanada等（1985）获得绵羊和山羊体外受精后代，并于1986年获得体外成熟卵母细胞体外受精的第一头犊牛。 我国学者卢克焕（1987）在爱尔兰获得全体外过程的试管牛犊。 二、意义 1. 可以以较低的成本，大规模地批量生产各发育期的动物胚胎。 2. 作为胚胎移植技术常规服务的一部分。 三、技术程序 体外受精包括以下步骤：卵母细胞的获取、卵母细胞成熟、精子获能、卵母细胞受精和受精后的体外胚胎培养。 (一)卵母细胞的获得和成熟培养 1.屠宰场卵巢 从屠宰场采集卵巢保持在30℃～35℃，运回实验室，吸取2～6mm直径的卵泡。 2.活体取卵母细胞 20世纪80年代末90年代初，超声波或腹腔镜引导经阴道穿刺采卵，吸取有腔卵泡中的卵母细胞的技术问世，这项技术与屠宰后动物卵巢取卵相比，称为活体取卵（OPU，ovum pick-up）。 3.卵母细胞成熟培养 选择卵丘细胞完整，形态良好的卵母细胞进行成熟培养。培养条件是39℃，5%CO2，卵母细胞在培养皿液滴内培养约24h。 (二)体外受精 1.精子的获能处理 哺乳动物的获能方法有培养和化学诱导两种方法。 2.受精 获能的精子和成熟的卵子共培养。 配子与胚胎生物技术 第一节 动物胚胎移植 胚胎移植（embryo transfer）：将动物的早期胚胎移植到与胚胎相对应生理状态的雌性受体子宫中，使之发育为成熟的个体。 提供胚胎的个体称为供体，接受胚胎的个体称为受体。 一、胚胎移植发展历史 1890年英国剑桥大学Walter Heape首次获得兔胚胎移植成功。 20世纪30年代，在兔、大鼠和小鼠方面进行了更多的实验，成为实验生物学中研究受精、胚胎发育等问题的一个重要方法。 家畜的胚胎移植，最早是在20世纪30年代在绵羊和山羊方面进行的。 在20世纪60年代以来，对家畜胚胎的采取、保存、移植等技术环节进行了