NY_T 4142-2022 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程 微量肉汤稀释法.docx

ICS 67.120.10 CCS X 22 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 4142—2022 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术 规程 微量肉汤稀释法 Te chnical code of practice of antimicrobial susceptibility tests for bacteria isolat ed from animals—Broth microdilution method 2022-07-11 发布 2022-10-01 实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 4142—2022 前 言 本文件按照GB/T1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口。 本文件起草单位：中国兽医药品监察所、上海市动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：张纯萍、姜芹、赵琪、张文刚、宋立、孙冰清、崔明全、商军、徐士新、顾欣、王鹤佳。 工 1 NY/T 4142—2022 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程 微量肉汤稀释法 1 范围 本文件规定了动物源细菌对抗菌药物敏感性测试微量肉汤稀释法的操作步骤、结果判读、质量控制 记录及生物安全等技术要求。 本文件适用于采用微量肉汤稀释法测定抗菌药物对动物源细菌的最小抑菌浓度(MIC)。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB19489 实验室 生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 最小抑菌浓度 minimum inhibitory concentration,MIC 能抑制肉眼可见的细菌生长的最低抗菌药物浓度 3.2 菌落形成单位 colony forming unit,CFU 在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落。 4 试剂或材料 4.1 要求 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682 规定的三级水，培养基或缓冲液按附录 A 配制或用商品化产品。 4.2 试剂 4.2.1 氯化钠 4.2.2 氯化钙 4.2.3 氯化镁 4.2.4 抗菌药物：应选择标准品或对照品，具体种类见附录B 的表B.1 和表B.2。 4.3 溶液制备 4.3.1 无菌生理盐水：取氯化钠8.5g, 加水适量使溶解并稀释至1000 mL,121℃ 灭菌15 min。 4.3.2 抗菌药物非水溶剂和稀释剂：按照附录C 中表C.1 的规定执行。 4.4 培养基制备 4.4.1 阳离子调节 Mueller Hinton 肉汤(CAMHB): 按照 A.1 的规定执行。 4.4.2 营养琼脂：按照A.2 的规定执行。 4.4.3 哥伦比亚血琼脂：按照A.3 的规定执行。 4.4.4 MH 琼脂：按照 A.4 的规定执行。 2 NY/T 4142—2022 4.5 质控菌株 4.5.1 大肠埃希菌ATCC 25922:用作肠杆菌科的质控。 4.5.2 粪肠球菌ATCC 29212: 用作肠球菌属的质控。 4.5.3 铜绿假单胞菌 ATCC 27853:用作铜绿假单胞菌的质控。 4.5.4 金黄色葡萄球菌 ATCC 29213:用作葡萄球菌属的质控。 4.5.5 空肠弯曲杆菌ATCC 33560:用作弯曲杆菌属的质控。 4.5.6 肺炎链球菌 ATCC49619: 用作链球菌属和巴氏杆菌属的质控。 4.6材料 0.5麦氏单位(McFarland)标准比浊液。 5 仪器设备 5.1 pH 计：测量范围pH 0～14,精度0.02 pH 单位 5.2 恒温培养箱。 5.3微需氧培养箱或微需氧产气袋。 5.4二级生物安全柜。 5.5 超低温冰箱： -70℃(或以下)。 5.6微量移液器：10μL,100μL,1000μL。 5.7比浊仪：精确度±0.10麦氏浊度单位(MCF)。 5.8分析天平：感量0.01 mg 和0.01 g。 5.9 全自动药敏判读系统。 6 操作步骤 6.1抗菌药物溶液制备 6.1.1 储备液 取抗菌