DB64 1139_2015  枸杞中总黄酮含量的测定 高效液相色谱法.docx

ICS 65.020.01 B 04 宁 夏 DB64 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/ T 1139—2015 枸杞中总黄酮含量的测定 高效液相色谱法 · Determination of total content of flavonoids in the wolfberry—HPLC methor 2015- 11-30发布 2 0 1 5 - 1 1 - 3 0 实 施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发布 DB64/ T 1139—2015 前 言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏回族自治区农牧厅归口。 本标准主要起草单位：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所 宁夏农林科学院。 本标准主要起草人：王晓菁、吴燕、牛艳、张锋锋、姜瑞、白小军。 工 1 DB64/ T 1139—2015 枸杞中总黄酮含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了高效液相色谱法测定枸杞中总黄酮的测定方法。 本标准适用于枸杞中总黄酮含量的测定。 本方法检出限为5mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 样品用70%甲醇溶液超声提取，用液相色谱-紫外检测器在波长360nm处测定，外标法定量。 4 试 剂 除非另有规定，本法所使用试剂均为分析纯。 4.1 水：GB/T 6682, 一级。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 70%甲醇溶液。 4.4 芦丁标准品：纯度≥98%。 4.5 芦丁标准溶液：准确称取一定量的芦丁标准物质(精确到0.0001g) 用70%甲醇溶液溶解并 定容，配制成10.00mg/mL标准储备液。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪 (HPLC): 配有紫外检测器。 5.2 超声波清洗器。 5.3 离心机：4000 r/min。 5.4 高速万能粉碎机：10000 r/min。 5.5 分析天平：感量±0.0001g。 5.6 微孔滤膜：有机相，0.45 μm。 6 试样的制备 2 DB64/ T 1139—2015 枸杞试样：样品于-18℃冷冻冰箱中保存。试验时将样品取出，立即用高速万能粉碎机(可加少量 的液氮)粉碎(30g样品粉碎时间为30s), 置于样品瓶中， -18℃冷冻备用。 7 试样提取 精确称取1g (精确到0.001g) 粉碎的枸杞样于100mL离心管中，加70%甲醇溶液25mL, 摇匀，放置 超声波中超声提取60min (期间振摇2次-3次),取出后在4000r/min转速下离心10min,上清液过0.45 μm 微孔滤膜过滤，供高效液相色谱-紫外检测器测定。 8 高效液相参考条件 a) 色谱柱： XBridge C18柱”,250mm×4.6mm(i.d),5.0um, 或相当者； b) 柱温：30℃; c) 流动相：甲醇-4%甲酸溶液，详细梯度洗脱条件见表1; d) 流速：1.0mL/min; e) 波长：360nm; f) 进样量：10μL。 表1 流动相详细梯度洗脱条件 时间/min 甲醇/V 4%甲酸溶液/V 0 50 50 15.0 50 50 15.1 80 20 25.0 80 20 25.1 50 50 9 标准曲线的绘制 用70%甲醇溶液将芦丁标准溶液逐级稀释得到浓度为0、5、10、20、50、100、200ug/mL的标准工作 液，依次由低到高进样检测，质量浓度X(ug/mL)为横坐标，以响应值(峰面积)Y为纵坐标进行线性回 归，得到标准曲线回归方程。 10 测定 待测液中芦丁的响应值应在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。同时做空白试 验。 11 结果计算 试样中总黄酮含量以芦丁的质量分数w计，单位以毫克每千克 (mg/kg) 表示，按式(1)计算： 1) 色谱柱是由Waters公司提供的产品。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。 如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 3 DB64/T 1139—2015 式中： .. (1) 一试样中总黄酮的含量，单位为毫克每千克 (mg/kg); c 一从标准曲线上查得待测液中总黄酮的质量浓度，单位为微克每毫升 (ug/mL); V— 试样中加入的提取溶液体积，单位为毫升 (mL); m— 试样的质量，单位为克