NY_T 3631-2020CN 茶叶中可可碱和茶碱含量的测定 高效液相色谱法.docx

ICS 65.020.01 B 04 NY 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 3631—2020 茶叶中可可碱和茶碱含量的测定 高效液相色谱法 Determination of theobromine and theophylline in tea— High performance-liquid chromatography 2020-07-27 发布 2020-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 3631—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院茶叶研究所、农业农村部茶叶质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：刘新、蒋迎、周苏娟、汪庆华、马桂岑、陈利燕、张颖彬。 1 NY/T 3631—2020 茶叶中可可碱和茶碱含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了茶叶中可可碱、茶碱含量的高效液相色谱测定法。 本标准适用于茶叶中可可碱、茶碱含量的测定。 本方法可可碱的定量限为3.2 mg/kg, 茶碱的定量限为4.4 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件.其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8303 茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定 3 原理 茶叶试样中的可可碱和茶碱用70℃热水提取.经净化，过滤定容.Cis反相液相色谱柱梯度洗脱分离， 271nm 波长处测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，本方法使用试剂为分析纯。水应符合GB/T 6682 中一级水的要求。 4.1 乙腈(C?H?N,CAS:75-05-8): 色谱纯。 4.2 甲醇(CH?O,CAS:67-56-1): 色谱纯。 4.3 甲酸(CH?O?,CAS:64-18-6)。 4.4 氢氧化钠(NaOH,CAS:1310-73-2)。 4.5 重质氧化镁(MgO,CAS:1309-48-4): 分析纯氧化镁经900℃灼烧30 min 即为重质氧化镁，储存于干 燥器中。 4.6 可可碱(C?H?N?O?,CAS:83-67-0): 纯度≥98%。 4.7 茶碱(C?H?N?O?,CAS:58-55-9): 纯度≥98%。 4.8 液相流动相 B:取 5 mL 甲酸(4.3)用水定容至1L。 4.9 标准储备溶液(1000mg/L): 分别称取可可碱(4.6)0.1 g (精确至0.0001g)、茶碱(4.7)0.1g(精确 至0.0001g),用甲醇(4.2)分别定容至100mL (其中可可碱标准物质可先用少量2g/L 的 NaOH 溶液溶 解)。配制好的1000mg/L 的标准储备液储存于一18℃冰箱，储存期6个月。 4.10 混合标准工作液：分别准确移取10μL、20μL、50μL、100μL、250μL、500μL、1000μL可可碱和1 μL、2μL、5μL、10 μL、20μL、50μL、100μL茶碱的标准储备溶液(4.9)用水或初始流动相稀释并定容至 10mL, 得到一系列标准工作液(质量浓度分别为可可碱1mg/L、2mg/L、5 mg/L、10 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L,和茶碱0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L),0℃~ 5℃保存，保存期1个月。 4.11 微孔滤膜：孔径0.45 μm, 水相。 5 仪器设备 5.1 高效液相色谱仪：配备紫外或二极管阵列检测器。 5.2 分析天平：感量0.0001g 和0.001 g。 2 NY/T 3631—2020 5.3 恒温水浴锅：控温精度±1℃。 5.4 离心机：≥4000 r/min。 5.5 离心管：容量50 mL 5.6 容量瓶：容量25 mL 6 试样制备 茶叶样品按GB/T 8303 规定制备并测定干物质含量。 7 分析步骤 7.1 提取 称取0.5g (精确至0.0001g) 茶叶试样于50mL 离心管(5.5)中，加入1.0g 重质氧化镁(MgO) 。 加 入15mL70℃ 水后，置于70℃水浴中，期间不时振荡以保证料液充分接触，浸提10 min,冷却至室温， 4000 r/min 离心10 min, 上清液转移至25mL 容量瓶中。残渣再加入10 mL70℃ 水，重复浸提操作一 次。合并两次提取的上清液，冷却至室温，用水定容至25 mL。