DB64 769_2012  马铃薯脱毒苗污染控制技术规程.docx

ICS 65.020 B 16 宁 夏 DB64 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/T 769—2012 马铃薯脱毒苗污染控制技术规程 2012-03-28实施2010-03-28发布 2012-03-28实施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发布 DB64/ T 769—2012 前 言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏回族自治区农牧厅归口。 本标准由宁夏农林科学院植物保护研究所起草。 本标准主要起草人：沈瑞清、康萍芝、张丽荣、郭成瑾、刘浩、张华普、张萍、白小军。 工 1 DB64/ T 769—2012 马铃薯脱毒苗污染控制技术规程 1 范围 本标准规定了马铃薯脱毒苗污染控制技术的术语和定义、污染控制技术。 本标准适用于马铃薯脱毒苗的污染控制。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 18133 马铃薯脱毒种薯 NY/T 401-2000 脱毒马铃薯种薯(苗)病毒检测技术规程 DB64/T 711-2011 马铃薯脱毒种薯(苗)病毒分子检测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 脱毒苗 应用茎间组织培养技术获得的，经检测确认不带马铃薯卷叶病毒 (PLRV)、 马铃薯X病毒 (PVX) 马铃薯Y病 毒(PVY)、 马铃薯A病 毒(PVA)、 马铃薯S病毒(PVS) 等病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd) 的再生试管苗，经过组织培养方法大量扩繁且不带上述病毒或类病毒用于生产一级种薯的试管苗。 4 脱毒苗污染控制技术 4.1 操作前消毒 4.1.1 无菌操作室消毒 紫外线杀菌 操作前以波长为260nm的紫外线灯照射杀菌20min～30 min, 操作时关闭。 熏蒸灭菌 每立方米空间用甲醛和高锰酸钾3:1的比例密闭熏蒸10h～12h,每隔4d～5d1 次。无菌室经常使用时， 在接种前1天用3%～5%的来苏尔液将室内全面消毒或用甲醛溶液每隔2d～3d 洒地消毒1次。 4.1.2 操作用具消毒 2 DB64/ T 769—2012 将镊子、剪子、苗瓶等使用器具放于配制的路酸钾洗液(重路酸钾25g、水50ml、 浓硫酸450ml) 中 浸泡，除去油污，再用清水冲洗数遍后晾干。 4.1.3 超净工作台消毒 操作前打开紫外线灯照射20min～30min, 再用75%酒精消毒擦拭工作台面、台壁，每周要清洗滤板1 次 。 4.1.4 工作人员消毒 工作服使用波长为200nm～300nm 紫外线照射消毒30min。工作人员进入接种室前双手必须肥皂洗净， 再用75%酒精擦试消毒，同时穿好洁净的工作服，换上托鞋，戴上专用帽子和口罩，尽量减少在室内走 动 。 4.1.5 培养基湿热灭菌 在每升配制好的MS培养基中加入山梨酸钾0.18g或抑菌剂(50mg硫酸庆大霉素+50mg氨苄青霉素+ 50mg 硫酸链霉素+0.4g多菌灵)组成混合培养基，然后取定量该培养基装入苗瓶中，勿粘于瓶口或瓶壁， 且封口要严密，装后放入高压灭菌锅中消毒灭菌20min～30min, 灭菌压力为7.84×10Pa～9.8×10Pa, 121℃,灭菌后取出冷却备用。 4.2 操作中消毒 4.2.1 开启超净工作台，用灭菌纱布沾上75%的酒精仔细擦拭剪刀、镊子以及苗源瓶、接种瓶外壁等 器具，并放于工作台面上。 4.2.2 点燃酒精灯，将苗源瓶、接种瓶紧靠于酒精灯前方左右两侧，再将镊子、剪刀等放于酒精灯外 焰上燃烧消毒，要注意消毒尽可能延伸至触及瓶口的位置，待冷却后快速剪苗、接茎段。每接一瓶所用 器械消毒1次。 4.2.3 台面上尽量少放瓶子以保证气流畅通。操作结束后，及时移出接种材料，然后清理台面。 4.3 操作后杂菌的控制 4.3.1 培养室消毒 每隔2d～3d, 用甲醛溶液洒地消毒1次或用75%酒精喷雾降尘1次。非工作人员不得出入培养室， 作人员入内必须穿戴洁净的工作服，并套鞋套。 4.3.2 保证接种苗瓶的瓶口紧密 接种后的苗瓶瓶口用封口膜封口，并用线绳扎紧，减少瓶内与室内空气的对流，控制气流传菌。 4.3.3 及时清除污染菌 将切断接种好的苗瓶送至培养室进行培养，随时观察培养瓶苗的生长情况，如观察发现污染，立即 移离培养室，集中深埋或远距离销毁。 4.4 病毒检测 4.4.1 检测方法 按GB 18133、DB64/T 711-2011的规定进行。 3 D