DB64_T 1082-2015  枸杞中总黄酮含量的测定-分光光度比色法.docx

ICS 65.020.01 DB64 宁 夏 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/ T 1082—2015 枸杞中总黄酮含量的测定-分光光度比色法 Method for detemination of total flavonoids in wolfberry-Colorimetric method 2015- 11-22发布 2 0 1 5 - 1 1 - 2 2 实 施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发 布 I DB64/ T 1082—2015 前 言 本标准的编写格式符合GB/T 1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏宝塔化工中心实验室(有限公司)提出。 本标准由宁夏回族自治区农牧厅归口。 本标准起草单位：宁夏宝塔化工中心实验室(有限公司),宁夏产品质量监督检验院，宁夏出入境 检验检疫局。 本标准主要起草人：于惠、康磊、邢雅琴、马立新、张立忠、吕林昌、郭玉生、李拥军、张瑞、李 宏校、王伟、李竹岩。 1 DB64/ T 1082—2015 枸杞中总黄酮含量的测定-分光光度比色法 1 范围 本标准规定了枸杞中黄酮类化合物总含量的测定方法。 本标准适用于经干燥加工制成的各品种的构杞成熟干燥果实，其方法的检出限为0.05g/100g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 黄酮类化合物 (flavonoids)是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮 (flavone) 结构的化合物。 在弱碱性条件下，溶于乙醇的黄酮类化合物与铝盐生成鳌合物，加氢氧化钠溶液后显色，用分光光度计 测定吸光度。在一定的浓度范围内，其吸光度值与黄酮类化合物的含量成正比。通过与标准曲线比较， 可定量测定黄酮类化合物的含量。 4 试剂和材料 除非另有说明，在进行分析中仅使用确认为分析纯的试剂和应符合 GB/T 6682 中规定的至少三级 的水。 4.1 60%乙醇溶液：量取600mL 无水乙醇 (C?H?OH) 至 1L 容量瓶中，加水定容。 4.2 50g/L 亚硝酸钠溶液：称取5.0g 亚硝酸钠 (NaNO?) 溶解于水中并定容至100mL。 4.3 100g/L 硝酸铝溶液：称取17.6g 硝酸铝 (Al(NO?)? ·9H?O) 溶解于水中并定容至100mL。 4.4 40g/L 氢氧化钠溶液：称取10.0g 氢氧化钠 (NaOH) 溶解于水中并定容至250mL。 4.5 60℃~90℃石油醚。 4.6 芦丁标准品(分子式： C??H?oO16;CAS:153-18-4): 已知质量分数≥95.0%。 4.72.0000g/L 芦丁储备液：精密称取0.2000g (精确至0.0001g) 的芦丁，加乙醇溶液溶解并稀释至 100mL。 该溶液三个月内有效。 4.8 0.2000g/L芦丁标准使用液：移取5.00mL 芦丁储备液于50mL 容量瓶中，加乙醇溶液溶解并稀 释至刻度。适时配用。 5 仪器与设备 5.1 实验室用样品粉碎机。 5.2 分析天平：感量0.1 mg。 2 DB64/ T 1082—2015 5.3 分光光度计：用10mm 比色杯，可在510nm 下测吸光度。 5.4 超声波清洗器。 5.5 水浴锅。 5.6 冷冻室可以达到-18℃的常用冰箱。 5.7 玻璃仪器：索氏提取器，25mL 具塞比色管，50mL 、100mL 、250mL 及 1L 容量瓶。 5.8 网目为0.5 mm 的样品筛。 6 样品制备 将枸杞置于冰箱中冷冻，待其变硬变脆后，立即采用粉碎机粉碎，迅速过0.5 mm 筛。将过筛后 的样品放入干燥器中避光保存。 7 分析步骤 7.1 样品溶液的制备 准确称取样品粉末1.0 g±0.0002g, 用滤纸包裹，置于索氏提取器中，用石油醚回流4 h 除去脂类 等杂质。待残渣中的石油醚挥发后，将包有样品的滤纸置于100mL锥形瓶中，加入乙醇溶液40mL, 在70℃、120 W～150W 超声频率下超声提取。提取2 次，每次提取时间30min 。合并2次的提取 液，将提取液转移至100mL 的容量瓶中，锥形瓶和包有样品的滤纸用乙醇溶液多次洗涤，并将洗涤液 一并转移至100mL 的容量瓶中，用乙醇溶液定容，待测。 7.2 工作曲线的绘制 吸取0.00、0.25、0.50、1.00、2.50、3.50、5.00、7.50、10.0