DB64 1020_2014  马铃薯脱毒种薯（苗）生育期病毒（类病毒）检测技术规程.docx

ICS 65.020 B 16 宁 夏 DB64 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/T 1020—2014 马铃薯脱毒种薯(苗)生育期病毒(类病毒) 检测技术规程 2014-11-26发布 2 0 1 4 - 1 1 - 2 6 实 施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发布 DB64/ T 1020—2014 前 言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏回族自治区农牧厅归口。 本标准主要起草单位：宁夏农业生物技术重点实验室、宁夏农林科学院固原农科所。 本标准主要起草人：宋玉霞、聂峰杰、张丽、巩橘、陈虞超、石磊、甘晓燕、李苗、郭志乾、吴林 科、詹红、张国辉、颉瑞霞、张小川、张岩、路洁。 1 DB64/ T 1020—2014 马铃薯脱毒种薯(苗)生育期病毒(类病毒)检测技术规程 1 范围 本标准规定了脱毒马铃薯种薯(苗)生育期病毒(类病毒)检测技术规程的术语和定义、检测对象、 抽样规则、检测时期、检测方法、判定规则和质量要求。 本标准适用于脱毒马铃薯组培苗和各级脱毒种薯不同生育期主要病毒、类病毒检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 18133 马铃薯种薯 NY/T 401-2000 脱毒马铃薯(苗)病毒检测技术规程 NY/T 1606-2008 马铃薯种薯生产技术操作规程 DB64/T 711-2011 马铃薯脱毒种薯(苗)病毒分子检测技术规程 3 术语和定义 NY/T 401-2000和NY/T1606-2008界定的以及下列术语和定义适用于本标准。 3.1 脱毒苗 应用茎尖组织培养技术获得的再生试管苗，经检验确认不带马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、 马铃薯S病毒 (PVS)、 马铃薯卷叶病毒 (PLRV) 等病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒 (PSTVd), 才确认是 脱毒苗。 3.2 组培苗 利用脱毒苗用组织培养方法大量扩繁的用于生产原原种的试管苗。 3.3 原原种 用脱毒苗在容器内生产的微型薯和在防虫网、温室条件下生产的符合质量标准的种薯或小薯。 3.4 原种 2 DB64/ T 1020—2014 由马铃薯脱毒原原种作种薯，在良好隔离区条件下生产的符合质量标准的种薯。 3.5 一级种 由马铃薯脱毒原种作种薯，在良好隔离区条件下生产的符合质量标准的种薯。 3.6 苗期 播种马铃薯出苗后至第6～8个叶片展平时期(脱毒试管苗移栽后30天内)。 3.7 现蕾期 马铃薯全田75%以上植株现蕾时期。 3.8 开花期 马铃薯全田75%以上植株开花时期。 3.9 成熟期 马铃薯全田75%植株茎叶变黄枯萎时期。 4 检测对象 主要检测以下7种病毒： a) 马铃薯X 病毒 (Potato virus X,PVX); b) 马铃薯Y 病毒 (Potato virus Y,PVY); c) 马铃薯S 病毒 (Potato virus S,PVS); d) 马铃薯卷叶病毒 (Potato leaf roll virus ,PLRV); e) 马铃薯M 病毒 (Potato virus M,PVM); f) 马铃薯A 病毒 (Potato virus A,PVA); g) 马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid ,PSTVd)。 5 抽样规则 5.1 组培苗抽样 5.1.1 脱毒苗 脱毒后种苗每株必须检测，扩大繁殖前再次检测。 5.1.2 组培苗 3 DB64/ T 1020—2014 随机抽取1%～2%的扩繁后的组培苗检测 5.2 抽样 田间抽样和块茎检验数量参照GB18133中6的规定。 6 检测时期 按生育期进行不同方法检测，检测器官见表1。 表1 马铃薯不同生育期病毒类病毒检测器官 检测方法 脱毒组培苗 苗期 现蕾期 开花期 成熟期 目测检测 植株 植株 块茎 免疫胶体金检测法(GICA) 叶片 叶片 酶联免疫吸附检测法(ELISA) 叶片 叶片 叶片 叶片 反转录—聚合酶链式反应检测法(RT-PCR) 叶片 叶片 叶片 叶片 块茎 7 检测方法 7.1 田间检测 7.1.1 目测检测 根据表2描述的马铃薯植株症状和块茎症状目测检测马铃薯病毒、类病毒病害。 表2 马铃薯主要病毒(类病毒)病症状表 症状类型 病原名称 植株症状 块茎症状 花叶型 马铃薯X病毒 (PVX) 轻型斑驳花叶，叶片颜色深浅不