生物化学实验DNA琼脂糖凝胶电泳.pptxVIP

生物化学实验DNA琼脂糖凝胶电泳第1页/共20页 实验原理琼脂糖为链状多糖 →绳状琼脂糖束→大网孔型 凝胶 ——分离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构 象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pHDNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与 分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA线 状DNA开环DNA第2页/共20页 不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围琼脂糖浓度（%） 分离范围（kb） 0.3 5-60 0.6 1-20 0.7 0.8-10 0.9 0.5-7 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 2.0 0.1-3第3页/共20页 琼脂糖凝胶中DNA的观察溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下 红色荧光第4页/共20页 主要实验器材电泳仪电泳槽缓冲液琼脂糖凝胶槽梳子取液器溴酚蓝第5页/共20页 电泳槽结构第6页/共20页 操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极（黑）电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相第7页/共20页 溶 胶第8页/共20页 准备胶槽第9页/共20页 凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml第10页/共20页 铺 胶第11页/共20页 凝胶凝固后取出梳子第12页/共20页 加缓冲液第13页/共20页 准备样品第14页/共20页 点 样第15页/共20页 电 泳第16页/共20页 注意观察溴酚蓝染液的迁移第17页/共20页 紫外灯下观察电泳结果第18页/共20页 照 相第19页/共20页 感谢观看！第20页/共20页