干货丨做标准曲线的12个经典问题.pdfVIP

⼲货⼁做标准曲线的12个经典问题 标准曲线的制作中，会有这样那样的问题，⽐如，常有⼈问：⼀定要做5个点？线性相关系数R值必须⼏个9才达标？标 曲是每天都做还是每次都做？标曲是否必须通过原点？…… 本⽂整理了标曲相关问题， ⼀起来看看吧！ 1、标准曲线的制作依据？ GB/T22554-2010 《基于标准样品的线性校准》中： 1）标准曲线的浓度范围应覆盖正常操作条件下的被测量范围； 2）标准样品的组分尽量与被测样品组分⼀致； 3）标准样品的浓度值应等距离的分布在被测量范围； 4）标准样品的个数⾄少应有3个浓度； 5）每个标准点⾄少重复2次，这个重复是指从稀释开始； 如果国家标准有相应的浓度系列推荐，尽量按国家标准。⼯作中我们经常采⽤线性校准，因为线性⽅程最为简洁。 2、什么是校准曲线？ 校准曲线包括标准曲线和⼯作曲线，前者⽤标准溶液系列直接测量，没有经过预处理过程，这对于样品往往造成较⼤误 差；⽽后者所使⽤的标准溶液经过了与样品相同的消解、净化、测量等全过程。 3、⾸先标曲要做⼏个点？ 标准曲线需要⼏个数据点，是由所检测组分的浓度范围、分析仪响应特性、⼲扰因素、浓度与检测信号响应类型有关 的。 3个点：对于⼀些低浓度，特别是微量分析，并且浓度范围不是很⼤的，检测器响应可靠，背景⼲扰⾮常⼩的，则可以 选⽤较少的⼯作点就⾏，⼀般有3个浓度点就⾜够了，有些甚⾄可以只⽤⼀个浓度点就⾏，另⼀个点直接⽤坐标原点。 4~6个点：对于平时测量的样品浓度范围较宽，并且检测器响应不完全是⼀次曲线 （直线）的，可以采⽤⼆次曲线或分 段校正⽅式，以减少数据偏差，这种情况就需要多⽤⼏个数据点，如果不分段，数据点有4~6个就够⽤。 ⾄少两个点：但如果是分段校正，则每段需要⾄少两个数据点。⽽对于⼀些样品⽆浓度范围规律的，特别是⼀些检测机 构，如果分析仪的检测响应可靠，环境因素影响少的，可以做校正曲线。若是环境因素影响⼤的，则不必做校正曲线， ⽽采⽤标准加⼊法或标准加⼊-⼀次稀释法反⽽简便⼀些。 实际上，我们⼀般是做五个点 （不包括零浓度）；⼀般以检出限的5~10倍为第⼀个点，以后根据1倍递增，最⾼浓度是 最低浓度的10~20倍为宜（理化分析实验为例）。当然，要根据仪器的灵敏度来调整。 4、标曲R值是⼏个9才合格？ 实验室应按检测标准 （⽅法）的要求使⽤标准溶液或标准物质建⽴标准曲线。所⽤标准溶液或标准物质应覆盖被测样品 的浓度范围。检测标准 （⽅法）如⽆具体的要求，⾄少使⽤5个标样 （除空⽩外）建⽴线性标准曲线，每个点重复测定 1-3次，对于筛选⽅法，线性回归⽅程的相关系数不应低于0.98，对于确证⽅法，相关系数不应低于0.99。 1-3次，对于筛选⽅法，线性回归⽅程的相关系数不应低于0.98，对于确证⽅法，相关系数不应低于0.99。 其实，⼤于0.99是判断是否为线性相关的⼀个标准，实际应⽤中线性⼤于0.999才是⽐较理想的。线性在0.99到0.999之 间的监测结果只⽤接近最⾼浓度⼀半（中间浓度）的位置才⽐较准确，如果线性⼤于0.999的话，在整个线性范围内都 会有⼀个⽐较满意的结果。 如果检测的线性不好，可以减少标准的覆盖范围，将标准的浓度调整到待测样品浓度附近，这样结果也是⾮常准确的。 例如，样品的浓度约20ppb，但在0~50ppb范围建⽴标准曲线，但线性⾮常不理想，这时可以将标准范围调整到 15~25ppb之间，作五个标准。 5、标准曲线的检验？ （1）线性检验： 即检验校准曲线的精密度。对于以4～6个浓度单位所获得的测量信号值绘制的校准曲线，分光光度法⼀般要求其相关系 数|r|≥0.9990，否则应找出原因并加以纠正，重新绘制合格的校准曲线。 （2）截距检验： 即检验校准曲线的准确度，在线性检验合格的基础上，对其进⾏线性回归，得出回归⽅程y=a+bx，然后将所得截距a与 0作t检验，当取95%置信⽔平，经检验⽆显著性差异时，a可做0处理，⽅程简化为y=bx，移项得x=y/b。在线性范围 内，可代替查阅校准曲线，直接将样品测量信号值经空⽩校正后，计算出试样浓度。 当a与0有显著性