微生物学实验详细介绍.pptxVIP

微生物学实验详细介绍;微 生 物 学 实 验;课程组人员: 王淑军 暴增海 马桂珍 王洪斌 陈静;课 程 简 介;实验一 显微镜使用及微生物形态观察 实验二 霉菌形态特征 实验三 细菌革兰氏染色及特殊结构观察 实验四 微生物的测微技术 实验五 酵母菌形态观察和死活细胞鉴别 实验六 玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌 实验七 培养基的配制和灭菌 实验八 微生物分离纯化及观察 实验九 显微镜直接计数法;实验十 平板菌落计数法 实验十一 微生物生长曲线的测定 实验十二 理化及生物因素对微生物生长 的影响 实验十三 微生物的生理生化反应特性 实验十四 微生物菌种保藏技术 ; 显微镜概述 微生物的个体微小，必须借助显微镜才能观察到。因此，显微镜就成为微生物学研究工作者不可缺少的基本工具。所以，了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握不同显微镜的使用方法是很有必要的。 显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。光学显微镜有普通光学显微镜、相差显微镜、微分干涉差显微镜、暗视野显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜和荧光显微镜。下面主要介绍普通光学显微镜。 ;;基础知识;与其他物镜不同，油镜需在载玻片与镜头之间加滴镜油，原因有二： 1.增加照明亮度 油镜的放大倍数可达100x，教具很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。为了不使通过的光线有所损失，必须造又精于加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的镜油。通常用香柏油（n=1.52）. 2.增加显微镜的分辨率 油镜的分辨率可达到0.2μm左右。;;;4.暗视野显微镜 暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。 ;5.相差显微镜 6. 偏光显微镜 偏光显微镜（polarizing microscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。;7.微分干涉差显微镜 DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，???标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。 ;;9. 透射电子显微镜 ;;10. 扫描电子显微镜 ;11. 显微操作技术 ;; 在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表： 物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm) 10× 0.25 5.40 40× 0.65 0.39 100× 1.30 0.11 ;显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积， 公式为: M = K1xK2 焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的 上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。 ;厚标本和薄标本;;瞳 距 调 节;屈 光 度 调 节;粗 调 松 紧 调 节 旋 钮;聚 光 镜 中 心 调 节;孔径光栏调节;孔径光栏开度与图象;孔径光栏的运用;操作步骤如下: (1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。 (2)载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最均匀 的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。 (3)转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变 光栏关小，看其亮点是否在视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到视野中 央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜的边缘相接为止。;3. 观察操作 (1) 低、高倍镜的使用: 先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时，把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高