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外源基因的表达及其优化策略第1页/共135页 生命科学学院第七章 外源基因的表达及其优化策略　　第一节　影响外源基因表达的因素 　　第二节　外源基因在原核细胞中的表达 　　第三节　外源基因在真核细胞中的表达第2页/共135页 生命科学学院本章重点掌握内容基因表达的关键要素及要求影响外源基因表达的因素表达产物的纯化甲醇酵母表达系统第3页/共135页 生命科学学院第一节　影响外源基因表达的因素　基因表达： 　　　从DNA分子有序地将其所承载的遗传信息,通过密码子和反密码子系统,转变由特定氨基酸顺序构成的多肽或蛋白质分子过程，从而决定生物有机体遗传表型。第4页/共135页 基因表达是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。 基因工程中基因高效表达研究是指外源基因在某种细胞中的表达活动，即剪切下外源基因片段，拼接到另一个基因表达体系中，使其能获得原生物活性又可高产的表达产物。生命科学学院第一节　影响外源基因表达的因素第5页/共135页 生命科学学院第一节　影响外源基因表达的因素　基因表达 　　　　遗传信息从DNA到蛋白质的传递过程——中心法则（central dogma）。 第6页/共135页 生命科学学院第一节　影响外源基因表达的因素　克隆基因的表达 　　　外源基因在宿主细胞中表达 外源基因 表达载体 重组载体 导入宿主细胞 在宿主细胞中 表达出蛋白质 提取蛋白 宿主细胞： 原核细胞或真核细胞第7页/共135页 生命科学学院第一节　影响外源基因表达的因素第8页/共135页 生命科学学院第一节　影响外源基因表达的因素 影响外源基因表达的因素主要有： 阅读框架 顺式作用元件 翻译过程 表达体系第9页/共135页 生命科学学院第一节　影响外源基因表达的因素 一、阅读框架对转化基因的影响 什么是阅读框架(open reading frame, ORF)? 二、顺式作用元件对基因表达的影响 1.对基因转录起始的调控 1)启动子 2)增强子 3)沉默子第10页/共135页 生命科学学院第一节　影响外源基因表达的因素 二、顺式作用元件对基因表达的影响 2.对基因转录终止的调控 1)终止子 2)衰减子 3.对DNA结构的影响 1)核基质结合区 2)绝缘子 3)基因座控制区第11页/共135页 生命科学学院第一节　影响外源基因表达的因素 三、翻译过程对表达的影响 1.翻译起始对基因表达的影响 2.密码子偏爱性对基因表达的影响 3.翻译终止对基因表达的影响 四、表达系统对表达产物的影响第12页/共135页 生命科学学院第二节 外源基因在原核细胞中的表达 外源基因表达系统由基因表达载体和相应的受体细胞两部分组成。宿主细胞分为两大类：第一类为原核细胞： 大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等；第二类为真核细胞： 酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。 目前使用最广泛的宿主菌是大肠杆菌和酿酒酵母，已建立了许多适合它们的克隆载体和DNA导入方法。许多外源基因已获得成功表达。第13页/共135页 生命科学学院第二节 外源基因在原核细胞中的表达用原核生物作宿主。 A dividing E. coli 原核或噬菌体启动子 MCS SD序列 终止子 第14页/共135页 生命科学学院第二节 外源基因在原核细胞中的表达大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征 大肠杆菌表达外源基因的优势 全基因组测序，共有4405个开放型阅读框架 基因克隆表达系统成熟完善 繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定 被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物第15页/共135页 生命科学学院第二节 外源基因在原核细胞中的表达大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征 大肠杆菌表达外源基因的劣势 缺乏对真核生物蛋白质的复性功能 缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统 内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白真核与原核生物结构上存在差别第16页/共135页 生命科学学院第二节 外源基因在原核细胞中的表达　一、原核生物细胞表达的特点 　　1.原核生物只有一种RNA聚合酶识别原核细胞的启动子，催化所有RNA的合成。 　 　　2.原核生物的表达是以操纵子为单位的。　　　 Z编码-半乳糖苷酶；Y编码-半乳糖苷透过酶；