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溶血实验和有机磷中毒第1页/共27页第2页/共27页溶血实验 实验目的 实验原理 实验步骤 实验后处理 注意事项第3页/共27页实验原理红细胞渗透脆性： 红细胞在低渗溶液中可发生破裂、解体的特性。红细胞渗透抵抗力： 红细胞耐受一定浓度的低渗溶液而不发生破裂、 解体的能力。最小抵抗力（RBC渗透脆性） ： 开始出现溶血的溶液浓度。最大抵抗力：完全溶血的溶液浓度。第4页/共27页红细胞的化学性溶血： 有机溶剂、酸、碱破坏红细胞膜的疏水键和膜蛋白上的次级键，溶解膜脂质，使膜蛋白质变性，造成红细胞溶解。第5页/共27页实验步骤1.制备红细胞悬液 取抗凝动脉血2ml 混匀离心弃上清夜 （配平、对称放置、5min、1500r/min） 加NS洗涤2次（离心弃上清夜） NS配成30%和3%红细胞悬液 第6页/共27页2.渗透性溶血试验 标记1-10号试管 依次加入不同浓度的NaCl溶液 滴入30%混悬液1-2滴，轻轻混匀 静置30min后判断各试管溶血现象第7页/共27页3.化学性溶血试验 标记11-14号试管 依次加入不同试剂1ml 11-NS 12-氯仿 13-HCl 14-NaOH 滴入3%混悬液2ml，轻轻混匀 静置30min后判断各试管溶血现象第8页/共27页4.结果判断不溶血：上层浅黄色或白色透明 下层红色不透明部分溶血：上层红色透明 下层红色不透明完全溶血：管内液体完全红色透明第9页/共27页不溶血部分溶血完全溶血第10页/共27页实验后处理1.完成表6－10、112.分析各处理因素对红细胞膜的影响及其 原理，写出实验报告。第11页/共27页注意事项1.红细胞渗透脆性实验为定量指标，氯化钠浓度的配制要求准确。2.向试管中滴加红细胞混悬液时要靠近液面，轻轻滴入，以免冲击力太大使红细胞破损，造成溶血假象。3.滴加红细胞混悬液后要轻轻摇匀，切勿剧烈震荡。静置一段时间后在光线明亮处观察。第12页/共27页有机磷中毒 实验目的 实验原理 实验步骤 实验后处理 注意事项第13页/共27页实验原理中毒的原理和症状中毒的原理:有机磷酸酯类为难逆性抗胆碱酯酶药中毒的症状:外周作用（M、N样作用）中枢作用（先兴奋后抑制）第14页/共27页解毒药作用原理 阿托品:小剂量阻断M受体，大剂量阻断N1受体，可兴奋呼吸中枢碘解磷定:复活胆碱酯酶 与游离的有机磷酸酯类结合第15页/共27页实验步骤1.家兔，称重，观察并记录其正常体症（R、 瞳孔大小、唾液分泌、肌张力、肌震颤等）。2.造模：耳缘静脉注射3.5%敌百虫(3ml/kg)，观察并 记录各种指标的变化。3.1.3.5排先静脉注射阿托品(1ml/kg) ，记录各指标的变化；10min后再静脉注射碘解磷定(2ml/kg) ，记录各指标的变化。4.2.4.6排给药相反。第16页/共27页观察指标瞳孔大小：尺测量其直径（mm）唾液分泌：-（无） 、+（少）、++（较多）、 +++（很多）大小便： 同上骨骼肌活动：-（无） 、+（局部）、++（全身） +++（全身并站立不稳或瘫卧桌上）第17页/共27页实验后处理1.完成表7-9。2.比较不同给药顺序解救效果的差异， 分析原因，写出实验报告。第18页/共27页注意事项1.测量瞳孔时应注意光线强弱对瞳孔大小的影响。实验前后光源的一致性。2.敌百虫溶液有较强的刺激性，静脉注射时要避免药物外漏。3.事先准备好抢救工作，中毒症状明显后立即解救。第19页/共27页小结红细胞渗透脆性的临床意义红细胞脆性增加：遗传性球形红细胞增多症，自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多者。 红细胞脆性减低：见于各型海洋性贫血，包括轻型，重型β海洋性贫血及血红蛋白增多病。缺铁性贫血，镰状红细胞贫血以及其它红细胞面积/体积比例增大情况，如肝病等。 第20页/共27页机体胆碱能神经纤维及其受体分布1.全部交感神经和副交感神经的节前纤维（N1-R）2.运动神经（N2-R）3.全部副交感神经的节后纤维（M-R）4.极少数交感神经节后纤维（M-R）第21页/共27页体内乙酰胆碱(Ach)神经递质的生理作用M样作用： 心率减慢，血压下降 支气管、胃肠道平滑肌收缩 瞳孔括约肌、睫状肌收缩（瞳孔缩小） 腺体分泌增加N样作用： 神经节兴奋 肾上腺髓质分泌增加 骨骼肌兴奋(收缩)第22页/共27页碘解磷定有机磷胆碱酯酶Ach胆碱 + 乙酸磷酸胆碱酯酶M样症状： HR、BP 恶心、呕吐、腹痛、腹泻 瞳孔缩小 流涎、大汗淋漓 呼吸困难阿托品++Ach作用的消失N样症状： 肌束颤动，重者呼吸肌麻痹中枢症状： 兴奋、不安、谵语等第23页/共27页解毒药效果比较 阿托品:优点：能迅速消除M样症状，也能解除一部分 CNS中毒症状，大剂量还可阻断神经节作用 缺点：对N2受体无效，不能制止骨骼肌震颤， 也无复活胆碱酯酶