细菌16S扩增详细步骤和注意要点.docxVIP

16S 全长通用引物： 芃 芃 8F 莁 AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 羇 1492R 螅 GGTTACCTTGTTACGACTT 或 肂 蒁 sgF 莈 AGAGTTTGATCATGGCTCAG 蒇 sgR 肅TAGGGTTACCTTGTTACGACTT 8F/1492R 使用最普遍，效果的确不错；但我们的经验是 sgF/sgR（上海生工公司扩 16S 推荐的引物）效果更好。这 2 对引物对应的PCR 产物都在 1.5kb 左右。 16SV6 区通用引物： 蝿 羅 V6-967F 袄 CAACGCGAAGAACCTTACC 蚀 V6-1046R 膀 CGACAGCCATGCANCACCT 这对引物也是我们用过的，效果很好。对应的PCR 产物约 90bp（V6 区平均长度 80-100bp，一说 79bp）。 引物到后，先在迷你离心机上短暂离心，将黏附在管口、管壁、管盖的核苷酸粉末甩到管底，然后在超净台操 作（因为 16S 序列所有细菌里都有，扩增时很容易混入杂菌，因此本实验涉及的每一种试剂、耗材都要非常小心， 保证无污染）：按照引物合成单的说明，加入灭菌的TE 缓冲液，如果没有，灭菌的双蒸水也行（注意每OD 加入量不等于最终加入量，一般引物合成是2OD）。溶解核苷酸粉末后，用枪头吹吸混匀。取5μL 溶液转移到另一个灭菌的EP 管，加入 45μL 灭菌的双蒸水，即稀