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目的基因的亚克隆 实验题目 ：目的基因的亚克隆 一、实验目的 1、掌握细菌基因组提取的方法和原理。 2、掌握限制性核酸内切酶处理基因组及其结果分析。 3、掌握基因片段回收的方法。 二、实验原理 细菌基因组的提取：通过碱法或者酶法裂解细菌之后，可以将胞内的 核酸和蛋白质全释放出来。DNA溶于1mol/L的NaCl中，不溶于 0.14mol /L的NaCl，而RNA溶于0.14mol/L的NaCl不溶于1mol/L的NaCl中，通过 溶液中盐浓度的变化可以将DNA和RNA 分开。氯仿－异戊醇法除去蛋白， 2倍体积乙醇将DNA沉淀出来。 限制性核酸内切酶只作用于特定的位点，处理基因组后只会得到有限 的片断。通过单酶切或者多酶切后电泳检验就可以得到与物种本身有 关的特定的图谱。 电泳后选定目的基因的条带，紫外灯下将含有目的基因的凝胶切下， 使用凝胶回收试剂盒，将凝胶溶化后，通过吸附柱时，核酸片段就吸 附在柱上，洗脱液洗脱后加入2倍体积乙醇，核酸沉淀，TE溶解沉淀， 核酸片段得到回收。 三、试剂与器材 1、试剂 E.coli JM109，牛肉膏，胰蛋白胨，NaCl，微量细菌基因组 抽提试剂盒（上海生工），BamH I、Xho1 核酸内切酶（Takara），NE B 标准分子量片段 (1kb