分子生物学讨论课讨论题.pptVIP

讨论题目： 已知目的基因的cDNA序列（GenBank登录号：AK135903.1），拟采用基因工程技术在哺乳动物细胞中表达该序列中的133-1941位核苷酸序列，请设计实验方案。 当前第1页\共有30页\编于星期五\3点 根据133-1941的序列，设计PCR引物 从cDNA中扩增该序列 得到扩增产物后将产物插入质粒 该质粒扩增后转染哺乳动物细胞，纯化后进行表达 1 2 3 4 我们的方案： 当前第2页\共有30页\编于星期五\3点 根据133-1941的序列，设计PCR引物 当前第3页\共有30页\编于星期五\3点 引物设计目的、原理及原则 1 搜索、设计引物 3 学习使用GenBank 2 根据原则筛选引物 4 当前第4页\共有30页\编于星期五\3点 引物设计的目的 目的是找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功，但遵循某些原则，则有助于引物的设计。 引物设计的原理 1、 择合适的靶序列：设计引物之前，必须分析待测靶序列的性质，选择高度保守、碱基分布均匀的区域进行引物设计。? 2、 长度：一般来说，寡核苷酸引物长度为 15～30bp。? 3、 Tm 值：引物的 Tm 值一般控制在 55～60℃，尽可能保证上下游引物的 Tm 值一致，一般不超过