遗传病的诊断.ppt

* 医学遗传学 （二）特点和优点???? 1.以探测基因为目标，属于“病因诊断”，针对性强。基因诊断的出现使人们对疾病的诊断模式由传统的表型诊断过渡为现在的基因型诊断或称逆向诊断。 它和传统的表型诊断方法的主要差异在于直接从基因型推断表现型，即越过基因产物直接检测基因结构的改变（如单个碱基置换、缺失、插入、DNA的多态现象和遗传病的遗传异质性等）。??? 第二十九页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 2.基因诊断取材来源广泛。可以是机体各种组织的有核细胞，因此基因诊断不受取材细胞类型和个体发育阶段的限制，可以做出现症病人的诊断及产前、发病前的早期诊断。????3.利用基因探针进行检测，灵敏度高、特异性强。 第三十页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 ??? ? 4.基因探针可以是任何来源、任何种类；其检测目标可以是一个特定基因或一种特定基因组合；可以是内源基因或外源基因。因此，基因探针适用性强，诊断范围广。??? 5.被检测的基因是否处于活化状态对基因诊断并不重要，因此可对那些有组织和分化阶段表达特异性的基因及其异常进行检测和诊断。??? 第三十一页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 此外，随着分子生物学技术的飞速发展，从基因水平上诊断遗传病的病种越来越多，操作上日趋简单、方便、快速、准确。所以基因诊断是诊断遗传病最有前途的方法。 第三十二页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 原理 用已知的核苷酸序列测定未知的核苷酸序列。 主要包括分子杂交、DNA体外扩增（PCR）、DNA单链构象多态分析法等，其中最基本的技术是核酸分子杂交技术。 第三十三页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 基因诊断的工具 探针 限制性内切酶 第三十四页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 基因诊断 1、特异性寡核苷酸探针杂交 2、Southern印迹杂交 3、RFLP连锁分析 4、PCR 第三十五页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 1、等位基因特异性寡核苷酸探针杂交 原理：碱基互补配对原则 镰形细胞贫血的基因诊断 已知突变基因编码β珠蛋白链的 第6位密码子 GAG——GTG 谷Aa——缬Aa 第三十六页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 2. Southern 印记杂交 原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。 用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。 第三十七页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 Southern Blot 操作步骤： DNA 琼脂糖电泳 印迹转移 预杂交 杂交（变性探针） 洗膜 放射自显影或显色 第三十八页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 镰形红细胞贫血症的分子诊断 1.35Kb 1.15Kb ＣＣＴ　ＧＴＧ　ＧＡＧ 脯　　　缬　　　谷 ＣＣＴ　ＧＡＧ　ＧＡＧ 　脯　　　谷　　　谷 第１１号 染色体 β βＳ Mst II识别顺序 β βＳ Mst II Mst II C C T N A G G 第三十九页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 1.35Kb 1.15Kb 凝 胶 电 泳 图 HbAHbA HbAHbS HbSHbS 第四十页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 3、RFLP连锁分析 DNA多态性：SNP、STR RFLP：不同个体的DNA用用一种限制性内切酶切割时，DNA片段长度会出现差异。 第四十一页，共五十五页，2022年，8月28日 * 医学遗传学 已知限制酶MstII 识别序列 MstII 1.15kb CCTG AGG 1.35kb x probe CCTGTGG 突变后不能