PCR常见问题及解决方案.docx

PCR 常见问题及解决方案问题可能缘由解决方法 无产物或产量低模板浓度偏低或偏高电泳检测模板浓度,调整模板用量模板降解 重制备;基因组 DNA、cDNA 应小量分装后低温保存 模板中含有抑制反响的杂质 纯化模板 引物浓度缺乏调整引物浓度,特别是针对长片段 PCR 引物存在二级构造重设计引物,避开二级构造;优化退火温度引物降解引物应高浓度小量分装,-20℃保存,避开反复 冻融 Mg2+浓度偏低 适当提高 Mg2+浓度,从 1 mM 到 3 mM 以 0.5 mM 间隔递增,针对不同模板和引物摸索最正确 Mg2+ 浓度 dNTP 降解-20℃保存,小量分装,避开反复冻融 酶纯度低,扩增效率差选用高